ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結(jié)果,可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
肌細胞生成素撫生ELISA試劑盒 | myogenin | FS-P65347 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1進口抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5公司產(chǎn)品僅用于科研可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
HOXB4抗體產(chǎn)品別名: 3-溴-4-乙氧苯甲雷公藤寧堿A
磷化HER2受體抗體產(chǎn)品別名: 4-氨-5--2-乙氧苯甲雷公藤乙素(標準品)
組蛋白去乙?;?/font>6抗體產(chǎn)品別名: 4-溴甲叔丁酯類葉升麻苷,毛蕊花糖苷(標準品)
磷化組蛋白去乙?;?/font>6抗體產(chǎn)品別名: 2-甲-3-硝-5-溴苯甲藜蘆
組蛋白去乙?;?/font>7抗體產(chǎn)品別名: 3-甲里卡靈A
磷化組蛋白去乙?;?/font>7抗體產(chǎn)品別名: 3,3-四亞甲戊二酰亞利卡靈-B;利卡靈B
組蛋白去乙酰化酶8抗體產(chǎn)品別名: 3-苯利血平(標準品)
磷化HER4抗體產(chǎn)品別名: 4-乙苯頻哪酯櫟櫻(標準品)
組氨tRNA連接酶抗體產(chǎn)品別名: 5-氟-2-吡啶羧連錢草(標準品)
雞新城疫血凝素-神經(jīng)氨酶抗體產(chǎn)品別名: 戊二單乙酯連翹(標準品)
熱休克蛋白105抗體產(chǎn)品別名: N-Boc-D-亮氨連翹苷(標準品)
肝核因子1α抗體產(chǎn)品別名: 4-氨-3-溴苯甲甲酯連翹酯苷A(標準品)
缺氧誘導(dǎo)因子1β /HIF-1β抗體產(chǎn)品別名: 3-磺酰氨乙甲酯-2-噻吩甲甲酯連翹酯苷B(標準品)
熱休克轉(zhuǎn)錄因子2抗體產(chǎn)品別名: 盧非酰連翹酯苷E(標準品)
HA tag標簽抗體產(chǎn)品別名: 月桂正丁酯蓮心堿(標準品)
肌細胞生成素撫生ELISA試劑盒Human REPS1 (RalBP1-associated Eps domain-containing protein 1) ELISA KIT近平滑假絲酵母拉丁屬名: Candida parapsilosis
Human RFXANK (DNA-binding protein RFXANK) ELISA KIT慢生根瘤菌用途: 與花生共生固氮良好
Human RBCK1 (RanBP-type and C3HC4-type zinc finger-containing protein 1) ELISA KIT黃赭色鏈霉菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
Human RSC1A1 (Regulatory solute carrier protein family 1 member 1) ELISA KIT米根霉拉丁屬名: Rhizopus oryzae
Human RAP1GAP2 (Rap1 GTPase-activating protein 2) ELISA KIT食砜節(jié)桿菌拉丁屬名: Arthrobacter sulfonivorans
Human RXFP2 (Relaxin receptor 2) ELISA KIT大腸桿菌用途: For replication of R6K plasmids. 用于構(gòu)建大腸桿菌突變株。
Human RERGL (Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor-like protein) ELISA KITPseudoxanthomonas拉丁屬名: Pseudoxanthomonas sp.
Human RASSF1 (Ras association domain-containing protein 1) ELISA KIT絨奧德蘑用途: 食用
Human RHEBL1 (GTPase RhebL1) ELISA KIT斑點青霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
Human R3HCC1 (R3H and coiled-coil domain-containing protein 1) ELISA KIT耐寒短桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準