ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | I型膠原蛋白ELISA試劑盒 |
英文名稱 | Collagen TypeⅠ |
貨號(hào) | FS-P64879 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下:
1進(jìn)口抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5公司產(chǎn)品僅用于科研可檢測(cè)指標(biāo)齊全:生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等?
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
鋅指蛋白81抗體英文全稱Orphanin FQ英文簡(jiǎn)稱TET3檢測(cè)范圍1228nmol/L-
鋅指蛋白148抗體英文全稱Glutathione S transferases P1英文簡(jiǎn)稱CRLs檢測(cè)范圍1229nmol/L-
鋅指蛋白342抗體英文全稱Glutathione S transferases-π英文簡(jiǎn)稱PFK2檢測(cè)范圍1230nmol/L-4800pg/mL
鋅指蛋白350/癌易感因1結(jié)合蛋白抗體英文全稱Bone Morphogenetic Protein Receptor Ⅱ英文簡(jiǎn)稱GalNAc-T檢測(cè)范圍1231nmol/L-800ng/ml
鋅指蛋白263抗體英文全稱Oligoclonal bands英文簡(jiǎn)稱β3GalT檢測(cè)范圍1232nmol/L-20ng/ml
鋅指蛋白ZBBX抗體英文全稱Peroxiredoxin 4英文簡(jiǎn)稱ST6Gal檢測(cè)范圍1233nmol/L-400ng/ml
鋅指蛋白575抗體英文全稱fibronectin typeⅢ domain-containing protein 5英文簡(jiǎn)稱HLA-B27檢測(cè)范圍1234nmol/L-20ng/ml
AN1型鋅指蛋白5抗體英文全稱IQ motif containing GTPase activating protein 1英文簡(jiǎn)稱Pro-PSA檢測(cè)范圍1235nmol/L-2000pg/ml
鋅指蛋白568抗體英文全稱Ribonucleotide Reductase M1英文簡(jiǎn)稱GT2檢測(cè)范圍1236nmol/L-8ng/mL
鋅指蛋白473抗體英文全稱SATB1英文簡(jiǎn)稱CYP4A11檢測(cè)范圍1237nmol/L-800pg/ml
鋅指蛋白93抗體英文全稱Nucleolin英文簡(jiǎn)稱α-Fodrin Ab檢測(cè)范圍1238nmol/L-4800pg/ml
鋅指蛋白211抗體英文全稱Argyrophilic nucleolar organizer region proteins英文簡(jiǎn)稱β2-GPI-1-Ab檢測(cè)范圍1239nmol/L-800pg/ml
鋅指蛋白ZBTB3抗體英文全稱Lamin A;C英文簡(jiǎn)稱TAP檢測(cè)范圍1240nmol/L-2000U/L
鋅指蛋白437抗體英文全稱Melanoma-associated antigen 1英文簡(jiǎn)稱SLC27A4檢測(cè)范圍1241nmol/L-
鋅指蛋白415抗體英文全稱Trace Amine Associated Receptor 6英文簡(jiǎn)稱FOXN3檢測(cè)范圍1242nmol/L-10ng/ml
鋅指蛋白46抗體英文全稱skeletal muscle Actinin-α英文簡(jiǎn)稱NIS-Ab檢測(cè)范圍1243nmol/L-
趨化素樣因子超家族成員7(CKLFSF7)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phospho-Myt1 (Ser83) Antibody20 ul
趨化素樣因子超家族成員7(CKLFSF7)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Phospho-Myt1 (Ser83) Antibody100 ul
趨化素樣因子超家族成員7(CKLFSF7)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Myt1 Antibody20 ul
趨化素樣因子超家族成員4(CKLFSF4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Myt1 Antibody100 ul
趨化素樣因子超家族成員4(CKLFSF4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)MyD88 (D80F5) Rabbit mAb500 ul
趨化素樣因子超家族成員4(CKLFSF4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CD11c (3.9) Mouse mAb (redFluor™ 710 Conjugate)100 ul
趨化素樣因子超家族成員5(CKLFSF5)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb (Biotinylated)100 ul
趨化素樣因子超家族成員5(CKLFSF5)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Oct-4 (9B7) Mouse mAb100 ul
I型膠原蛋白ELISA試劑盒鼠維生素B12(VB12)ELISA Kit,48T/96T 拉丁屬名: Rhizopus stolonifer var. stolonifer
植物維生素B12(VB12)ELISA Kit,48T/96T 拉丁屬名: Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin
大鼠維生素B12(VB12)ELISA Kit,48T/96T 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
犬乙酰膽受體抗體(AChRab)ELISA Kit,48T/96T 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
人乙酰膽受體抗體(AChRab)ELISA Kit,48T/96T 拉丁屬名: Pseudomonas simiae
大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)拉丁屬名: Deinococcus sp.
人抗DNA酶B抗體(anti-DNase B)ELISA Kit,48T/96T 注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
人抗EB病抗體(EBV)ELISA Kit,48T/96T 拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae Hansen
操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)