ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢(xún)服務(wù)！

公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購(gòu)優(yōu)勢(shì)如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類(lèi)型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全：生長(zhǎng)因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
Sphingobacrium│siyangensis 泗陽(yáng)鞘鞍醇桿菌Sphingobacrium│siyangensis分離基物:土壤斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no分類(lèi)、研究，可以用來(lái)生物肥料。65生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：99%

Enrobacr│asburiae 阿氏腸桿菌Enrobacr│asburiae分離基物:禾本科牧草圓果雀稗莖凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no研究3生長(zhǎng)條件:30℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%

Arthrobacr│globiformis 球形節(jié)桿菌Arthrobacr│globiformis凍干物安全等級(jí):12生長(zhǎng)條件:26℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法 純度：99%

Cryptococcus neoformans 新型隱球酵母（新型隱球菌）Cryptococcus neoformans斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1YM培養(yǎng)基:酵母提取物 3.0 g，麥芽提取物 3.0 g， 葡萄糖 10.0 g， 蛋白棟 5.0 g， 瓊脂 20.0 g， 蒸餾 1000 ml， pH 6.2 +/- 0.2。121℃，15min。生長(zhǎng)條件:26℃，好氧存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：97%

Alrnaria solani 茄鏈格孢（番茄早疫病菌）（斜面）Alrnaria solani形態(tài)菌絲體全部埋生或部分表身生。菌絲無(wú)色至褐色。很少形成子座，無(wú)剛毛及附屬枝。分生孢子梗淡褐色至褐色，單枝或不規(guī)則分枝，短或長(zhǎng)，彎曲或呈屈膝狀。產(chǎn)孢孔出式產(chǎn)孢，合軸式延伸或不再延伸，孢痕明顯。分生孢子呈鏈狀或單生，淡褐色至深褐色，形狀不一，表面光滑或具微，有縱橫隔膜，頂端常具喙。菌絲有隔膜和分枝，較老的顏色較深。分生孢子梗直立或稍彎曲，色深而短，單生或叢生，有1-7個(gè)隔膜，大為50-90um ×6-9um.分生孢子自分生抱子梗頂端產(chǎn)生，通常單生，其形狀差異很大，倒棍棒形至長(zhǎng)橢圓形，顏色為淡金黃色至欖褐色，具長(zhǎng)嚎，表面光滑，9-11個(gè)橫隔膜，0到數(shù)個(gè)縱隔膜，大為117-154um ×9.8-15.7um,嚎長(zhǎng)等于或長(zhǎng)于孢身，有時(shí)有分枝，嚎寬2. 5-5um。分離基物:番茄葉片凍干安全等級(jí):1模式菌株:no教學(xué)科研綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷二氫鉀 3g，鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。生長(zhǎng)條件:25-28℃，好氧。存儲(chǔ)條件:2-8℃。 純度：97%

Phellinus igniariu 火木層孔菌(桑黃)（斜面）Phellinus igniariu斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫胺素微量，瓊脂 15g，pH 自然。生長(zhǎng)條件:25℃，好氧生長(zhǎng)特性@BNCC此菌在綜合PDA平板，圓桶形或近球形，橙黃色菌絲，好氧，28℃，不產(chǎn)孢子。 純度：98%

Gluconobacr│oxydans 氧化葡萄糖桿菌Gluconobacr│oxydans凍干物安全等級(jí):1230生長(zhǎng)條件:26℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法 純度：98%

Paenibacillus│slifer 星孢類(lèi)芽孢桿菌Paenibacillus│slifer分離基物:土壤斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no分類(lèi)、研究，可以用來(lái)生物肥料。65生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法；礦物油法 純度：98%
AMA人抗心肌抗體ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Phospho-FoxO1 (Ser319)  磷化叉頭蛋白家族1抗體狼（月腺大戟）四對(duì)苯二甲Human IDUα (Alpha-L-Iduronidase) ELISA Kit

Phospho-FoxO1 (Ser256)  磷化叉頭蛋白家族1抗體湖北貝母2,6-二苯Human NAGLU (N-Acetyl Alpha-D-Glucosaminidase) ELISA Kit

FOXO3A  叉頭蛋白O3A抗體干蟾皮2,6-二苯Human GLα (Galactosidase Alpha) ELISA Kit

Phospho-FoxO3a (Ser318/321)  磷化叉頭蛋白3A抗體千里光二-μ-雙[2-[(二甲)]苯基-C,N]二鈀(Ⅱ)Human α-GST (α-glutathione S-transferases) ELISA Kit

Phospho-FoxO3a (Ser294)  叉頭蛋白3A抗體仙鶴草5-溴-2-糖Human α-SCA (α-sarcomeric Actin) ELISA Kit

Phospho-FoxO3a (Ser253)  磷化叉頭蛋白3A抗體沒(méi)藥(天然沒(méi)藥)5-溴-2-糖Human α Actin (Alpha-Actin) ELISA Kit

FOXO4  叉頭蛋白O4抗體靈芝（赤芝）5-溴-2-糖Human α-Glu (Alpha Glucosidase) ELISA Kit

Phospho-FoxO4 (Ser193)  磷化叉頭蛋白4抗體陳皮檸檬二氫Human αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)