實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
耶爾森菌通用熒光定量PCR試劑盒探針法 | Yersinia spp. | 多種規(guī)格 | BJ-P10233 |
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 １．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 ４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
C643 (甲狀腺癌細胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
KTC-1 (甲狀腺癌細胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
ACT-1 (甲狀腺癌細胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
HLE (肝癌細胞(未分化))1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
A2058 (皮膚癌細胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
TOV-112D (上皮性卵巢癌細胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
MT-4 (T細胞白血病細胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
L-WRN（小鼠皮下結(jié)締組織細胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
NCI-H1755(肺癌細胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
NE-4C（小鼠神經(jīng)干細胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
耶爾森菌通用熒光定量PCR試劑盒探針法孕烷X受體(PXR)ELISA試劑盒 Pregnane X Receptor(PXR)ELISA Kit
孕酮(Pg)ELISA試劑盒 Progesterone(Pg)ELISA Kit
原肌球調(diào)節(jié)蛋白4(TMOD4)ELISA試劑盒 Tropomodulin 4(TMOD4)ELISA Kit
原肌球調(diào)節(jié)蛋白3(TMOD3)ELISA試劑盒 Tropomodulin 3(TMOD3)ELISA Kit
原肌球調(diào)節(jié)蛋白2(TMOD2)ELISA試劑盒 Tropomodulin 2(TMOD2)ELISA Kit
原肌球調(diào)節(jié)蛋白1(TMOD1)ELISA試劑盒 Tropomodulin 1(TMOD1)ELISA Kit
原肌球蛋白4(TPM4)ELISA試劑盒 Tropomyosin 4(TPM4)ELISA Kit
原肌球蛋白3(TPM3)ELISA試劑盒 Tropomyosin 3(TPM3)ELISA Kit
原肌球蛋白2β(TPM2)ELISA試劑盒 Tropomyosin 2 Beta(TPM2)ELISA Kit
原肌球蛋白1α(TPM1)ELISA試劑盒 Tropomyosin 1 Alpha(TPM1)ELISA Kit
