實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    小鼠肥大細胞瘤細胞：P815 

別稱P-815; P 815

種屬小鼠

年齡（性別）不詳

組織來源肥大細胞；肥大細胞瘤

生長特性半貼半懸

細胞形態(tài)肥大細胞

背景描述P815細胞源自DBA/2小鼠的肥大細胞瘤；P815細胞可吞噬乳膠微球，但不吞噬酵母聚糖或卡介苗；P815細胞沒有抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒作用。硫酸右旋糖酐、LPS或PPD不能抑制P815細胞生長；P815細胞產(chǎn)生，鼠痘病毒陰性。

生物安全等級1

生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例2×10^5cells/mL

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~18-22小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達情況lysozyme

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯(lián)系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經(jīng)濟

可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。

小鼠 IFNB1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 IFNB1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

小鼠 LTA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 XCL1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 XCL1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

小鼠 GSK3B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 GSK3B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

小鼠 SDC1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標

小鼠肥大細胞瘤細胞：P815 SOB培養(yǎng)基 SOB Medium 250g

5mL 內(nèi)皮細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

50T 乙型肝炎病毒基因分型PCR測定試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

牛奶培養(yǎng)基  250g

5次 一步法97孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（離心法） One-Step 96 Microwell Plate Colony Plasmid DNAOUT 常溫

MPO/c-ANCA  髓過氧化物抗體 規(guī)格: 0.1ml

3%NaCl  20支

液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基顆粒 Thioglycollate Medium 300ml/袋*10

Phospho-PLCG2(Tyr1217)  磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1mlANGEL2  ANGEL2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

APC5  細胞分裂周期蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM98B  FAM98B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Cofilin(Ser3)  磷酸化絲切蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

MMP-17  基質(zhì)金屬蛋白-17抗體 規(guī)格: 0.1ml