選擇ELISA試劑盒應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟性全面評價。
產(chǎn)品名稱：CCK elisa試劑盒說明書
英文名稱：CCK elisa Kit
規(guī)格：48T/96T
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月(4℃)；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液
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具有如下優(yōu)點：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型；
五、性價比非常好，節(jié)省實驗經(jīng)費。
試劑配制：
1、酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
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注意事項：
1加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”，因此盡量采用水??；
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；
②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時，反應板應水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結(jié)果，酶標儀不應置于陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試。
倉鼠/小鼠雜交瘤細胞；145-2C11LAMP-3/DC-LAMP/CD208 溶酶體相關(guān)膜蛋白3抗體100 ul
小鼠T淋巴細胞；Cl.Ly1+2-/9DC-SIGN/CD209 細胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體20 ul
小鼠腎集合管細胞(SV40轉(zhuǎn)化)；M-1DC-SIGN/CD209 細胞間粘附分子非整合素蛋白3抗體100 ul
綠色熒光蛋白標記小鼠前胃癌細胞；MFC-GFPDC-SIGNR/CD299 CD299抗體20 ul
小鼠腎足細胞；Mouse podocyteDEC-205/CD205/Ly75 淋巴細胞抗原75抗體100 ul
綠色熒光蛋白標記小鼠細胞；U14-GFPDECR1 線粒體2,4-雙烯酰輔酶A還原酶1抗體100 ul
小鼠漿細胞瘤；MPC-11PCDHB11 原鈣粘蛋白β11抗體100 ul
轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細胞；15P-1DEGS1 退行性精母細胞同源物1抗體100 ul
BALB/C小鼠肝上皮細胞；BNL 1ME A.7R.1DCP 異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗體1 mg
小鼠結(jié)腸癌細胞；CT26.WT [CT26WT]PCDHB13 原鈣粘蛋白13抗體100 ul
小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤；M5076DHCR7 7脫氫膽固醇還原酶抗體100 ul
小鼠正常肝細胞；NCTC 1469 [NCTC1469]Doublecortin 雙皮質(zhì)素抗體100 ul
615小鼠T細胞性白血病瘤株；L7712Phospho-Doublecortin (Ser297) 磷酸化雙皮質(zhì)素抗體100 ul
615小鼠T細胞性白血病瘤株；L7912DcR1 腫瘤壞死因子配體超家族成員10C100 ul
615小鼠肺癌瘤株；HP615DcR2/CD264/TNFRSF10D 誘捕受體2抗體100 ul
615小鼠滑膜肉瘤瘤株；ZM755TNFRSF12A/TWEAKR/CD266 腫瘤壞死因子配體超家族成員12A抗體100 ul
小鼠肝癌瘤株；H22DcR3/TR6 誘捕受體3抗體20 ul
615小鼠前胃癌瘤株；FcDDAH-II 雙甲基精氨酸水解酶2抗體100 ul
CCK elisa試劑盒說明書MPF成熟促進因子種屬: Staphylococcus│aureus金黃色葡萄球菌
Fibroblast Activation Protein成纖維細胞活化蛋白種屬: Dactylella│submersa水生隔指孢
fibroblast growth factor成纖維細胞生長因子種屬: Collinsella stercoris Kageyama and Benno 2000DSM 13279
fibroblast growth factor-10成纖維細胞生長因子10種屬: Paxillus│tomentosus毛柄樁菇
fibroblast growth factor-19成纖維細胞生長因子19種屬: Candida│intermedia中間假絲酵母
fibroblast growth factor-21成纖維細胞生長因子21種屬: Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod平田頭菇3-1
fibroblast growth factor-23成纖維細胞生長因子23種屬: Botryodiplodia│sp.球色單隔孢屬
programmed death-1程序性死亡分子-1種屬: Streptomyces│spiroverticillatus螺旋輪生鏈霉菌
programmed death Ligand 1程序性死亡配體-1種屬: 水質(zhì)糞大腸菌群質(zhì)控樣品水質(zhì)糞大腸菌群質(zhì)控樣品
Perforin 1穿孔蛋白1種屬: Penicillium│italicum Wehmer柑橘青霉菌
Vanillylmandelic Acid垂草扁桃酸種屬: Absidia│ramosa分枝犁頭霉
Intermedin垂體中葉素種屬: Agrocybe│salicacola楊柳田頭菇
Estradiol雌二醇種屬: Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm.平菇2
estrogen雌激素種屬: Sclerotinia│sclerotiorum (Lib.) de Bary油菜菌核病菌
Estrogen Receptor雌激素受體種屬: Bacillus│diffusus擴散芽孢桿菌
操作流程如下：
（1）僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
