細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96634 |
商品屬性：
名稱 A7r5 (大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞) 別稱A7R5 種屬大鼠 年齡（性別）胚胎 組織來源胸大動脈平滑肌 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 背景描述A7r5細(xì)胞培養(yǎng)到穩(wěn)定期后，表現(xiàn)出長高的肌激酶和肌氨酸磷酸激酶活性(CPK)；A7r5細(xì)胞分裂終止后合成骨肉型CPK。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達(dá)情況myokinase; creatine phosphokinase (muscle isoenzyme); myosin |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
人 DOPA Decarboxylase / DDC ELISA配對抗體
人 Cystatin F / CST7 ELISA配對抗體
食蟹猴 CD200R ELISA配對抗體
人 COQ7 ELISA配對抗體
人 Complement Component C2 ELISA配對抗體
人 Contactin 5 / CNTN5 ELISA配對抗體
人 Angiotensinogen / SerpinA8 / AGT ELISA配對抗體
人 ACRV1 ELISA配對抗體
人 SULT1E1 ELISA配對抗體
A7r5 (大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞)2 ug pGC- 1 pGC- 1 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人角蛋白II型支架6A(K2C6A)ELISA試劑盒
10mL 超級雜交液（Oligo探針） SuperHyb Solution for Oligo -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人腎足蛋白(Nephrin)ELISA試劑盒
1g Biotin -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人UDP-葡糖醛酸基1-6 (UDPGT 1-6)ELISA試劑盒
2 ug pTrcHis C pTrcHis C 低溫運輸，-20℃保存 6.25-400 pg/mL ELISA Kit for Human Somatostatin
250mL 堿性膠電泳液,10× Alkaline Gel Buffer, 10× 常溫 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3
2 ug pTXB1 pTXB1 低溫運輸，-20℃保存
80次 天凈沙單RNA擴(kuò)增試劑盒 Single Cell WTA Kit -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人磷脂酰肌醇-4,5-二3激催化劑α(PI3Kalpha)ELISA試劑盒
1瓶 HUV-EC-C株 HUV-EC-C 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphoribosyl pyrophosphate synthase-associated protein 1
10次 一管式點突變試劑盒 One-Tube Mutagenesis Kit -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人酯ELISA試劑盒
2 ug pSEP3 pSEP3 低溫運輸，-20℃保存北沙參亞碲酸鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ)進(jìn)口、國產(chǎn)Beisachang Sodium Tellurite Broth Base用于菌的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉0.2ml250
250mL Triton Lysis Buffer-2 Triton Lysis Buffer-2 常溫保存
