成都摩爾科學(xué)儀器有限公司提供的 氨基酸柱采用ODS鍵合硅膠為填充劑，填料采用高度可控的單分子層形成和封尾技術(shù)制備得到。通過柱前衍生化方法，18種氨基酸在柱上可獲得優(yōu)異的分離。

olumn:Sepax AAA, 4.6×250 mm

phase:A: ACN : 0.1 M NaAc = 7 : 93 (v/v), pH=6.5; B: ACN : H2O = 80 : 20 (v/v)

Time (min): B (%):0 15 18 25 30 30.01 450 15 24 40 40 100 100

Flow rate:1.0 mL/min

Temperature:36 oC

Detection:UV 254nm

Injection Volume:5 µL

Sample:18 Amino acids

1.Asp    2.Glu    3.Ser    4.Gly    5.His    6.Arg
7.Thr    8.Ala    9.Pro    10.Tyr    11.Val    12.Met
13.Cys    14.Ile    15.Leu    16.Phe    17.Trp    18.Lys

氨基酸柱特點(diǎn)

1.固定相以高純硅膠為基質(zhì)，采用高純度鍵合試劑，通過創(chuàng)新*的技術(shù)確保zui大單分子層覆蓋和全封尾。

2.高度可控的單分子層形成和封尾技術(shù)保證了可靠的柱間重現(xiàn)性。

3.填料表面覆蓋zui大化，因此具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。

4.填料為均一的球形顆粒，孔徑為120Å。通過運(yùn)用*的填裝技術(shù)裝填得到的色譜柱柱床密度均一穩(wěn)定，可保證具有zui高的柱效。

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Sepax AAA (氨基酸分析) 色譜柱手冊(cè)色譜柱信息
Sepax AAA (氨基酸分析) 色譜柱專為分離與分析游離氨 基酸而設(shè)計(jì)。該柱以硅膠基質(zhì)反相固定相材料為填料。Sepax AAA 固定相以高純度具有良好機(jī)械穩(wěn)定性的硅膠為基質(zhì)，采 用高純度鍵合試劑，通過創(chuàng)新*的技術(shù)確保zui大單分子層 覆蓋和全封尾。 高度可控的單分子層形成和封尾技術(shù)保證了 可靠的柱間重現(xiàn)性。Sepax AAA表面覆蓋率已達(dá)到zui大化， 因此具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。該填料為均一的球形顆粒，孔徑為 120 Å，比表面積為 300 m2 /g。 通過運(yùn)用*的勻漿填裝技術(shù)裝填得到的Sepax AAA柱柱床密度均一穩(wěn)定，因此可保證具 有zui高的柱效。通過PITC 衍生化方法，18種氨基酸可在Sepax AAA 柱獲得高分辨率的快速分析。
色譜柱的安裝和操作 
色譜柱在運(yùn)輸過程中或在沒有使用時(shí)，它的兩端總是用 堵頭進(jìn)行密封。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時(shí)，首先移去 兩端的堵頭。請(qǐng)注意將流動(dòng)相流動(dòng)的方向與柱上標(biāo)記的方向 保持*。除非出于特殊考慮，例如為了清除堵在色譜柱入 口端的臟污等而需要將色譜柱反接以進(jìn)行沖洗時(shí)，建議用戶 在接上色譜柱時(shí)一定要遵循柱上標(biāo)記的方向。由于色譜柱的 連接是整個(gè)色譜操作過程的一部分，如果密封卡套過緊，或 安裝不合適，或者密封卡套與色譜柱端口不匹配，都有可能 導(dǎo)致溶液的泄漏。請(qǐng)按照下面步驟將色 ，從而將色譜柱接入 HPLC 系統(tǒng)： (a) *次使用的管線，請(qǐng)依次將管線接頭和密封卡套裝在 徑 1/16"的管線上。密封卡套的寬口端應(yīng)朝向管線接頭。 (b) 將管線緊緊插入色譜柱的接口，向前滑動(dòng)密封卡套和管 線接頭，并使管線接頭的 ，然后擰緊管線接頭。 (c) 在用力將管線壓入 螺帽再進(jìn)一步緊固。 ) 對(duì)色譜柱的另一端采用上述方法進(jìn)行操作。 新的 Sepax AAA 柱是置于甲醇（或乙腈）水溶液中運(yùn)輸 的，在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中，硅膠填料可能會(huì)干涸。這時(shí)* 用 10-20 倍柱體積的純有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈進(jìn)行沖洗以活化色譜柱。接著可用用戶自己選擇的流動(dòng)相沖洗色譜柱。流 速由 0.1mL/min 逐漸升至所需的操作條件，直至基線穩(wěn)定為 止。如果柱壓和基線波動(dòng)較大，這可能是氣泡進(jìn)入了色譜柱中這時(shí)可用較高流速?zèng)_洗色譜柱 2-5 分鐘，例如對(duì)于 4.6x250 mm 的色譜柱可采用流速 1.5mL/min。
樣品和流動(dòng)相
為了避免色譜柱的堵塞，所有樣品和溶劑，包括緩沖溶 液在內(nèi)，都必須在使用前用 0.45 μm 或 0.2 μm 的濾膜過濾。 Sepax AAA 鍵合固定相的性質(zhì)為非極性，*流動(dòng)相為有機(jī) 試劑與水的混合物（如甲醇或乙腈的水溶液等）。流動(dòng)相在 使用前需要脫氣。一個(gè)簡(jiǎn)單的脫氣方法是將流動(dòng)相在水泵形成的真空下超聲 5 min。當(dāng) Sepax AAA 柱用于梯度洗脫 時(shí)，起始流動(dòng)相通常為 5%甲醇（或乙腈）。
色譜柱的保護(hù)
pH 避免在 pH 低于 2 或高于 11 的條件下使用 Sepax AAA 柱。較高的 pH 會(huì)溶解硅膠，從而使部分或全部的烷基 鏈從硅膠表面脫落，引起分離效率的 。為了獲得zui大的分離效果和延長(zhǎng)柱的使用壽命，請(qǐng)盡量 使用 pH 在 3 - 7.5 范圍內(nèi)的流動(dòng)相。
壓力 盡管 Sepax AAA 柱可在高至 5000psi 的壓力下使 用，但正常的操作壓力應(yīng)當(dāng)?shù)陀?3000psi。長(zhǎng)時(shí)間在高壓下運(yùn) 行會(huì)損壞色譜柱和*。由于壓力來源于流速，因此zui大 流速將受制于系統(tǒng)所能承受的壓力。一般而言，柱壓會(huì)隨著 色譜柱使用時(shí)間的增加而逐漸增加。壓力突然增加預(yù)示色譜柱入口端的篩板發(fā)生了堵塞。在這種情況下，建議將色譜柱 反接后用適宜的溶劑進(jìn)行沖洗。
溫度
zui高操作溫度為 60o C。長(zhǎng)時(shí)間在高溫(>75o C)下操作 也會(huì)損壞色譜柱，這種情形在高的pH (>8)條件下特別突出。
儲(chǔ)藏 *不用時(shí)，請(qǐng)不要讓水或緩沖液存留在色譜柱 中。在替代緩沖液時(shí)，請(qǐng)用至少 20-30 倍柱體積的 50%甲醇 （或乙腈）水溶液沖洗色譜柱，再用 20-30 倍柱體積的純有機(jī)溶劑如已睛進(jìn)行沖洗。。每根色譜柱在運(yùn)輸過程中均會(huì)附有 兩個(gè)可拆卸的堵頭。為了防止柱床干涸，請(qǐng)用堵頭塞緊色譜柱的兩端。
Sepax’s AAA 反 過 色譜柱氨基酸分析步驟
1. 原理 這種分析氨基酸的方法基于柱前衍生步驟，衍生化反應(yīng) 是在堿性條件下完成的，采用異硫氰酸苯酯和游離氨基酸 應(yīng)生成的 PTC-氨基酸衍生物可于 UV 254 nm 處被檢測(cè)到。通 PITC 衍生法改善的氨基酸分離同樣使其分析更有效。