【名稱】：VEGF,兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子ELISA試劑盒原理
【規(guī)格】：48T/96T
【方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
【性狀】： 液態(tài)
【Elisa試劑盒種屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
【標(biāo)本】血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等
【用途】：科研 實(shí)驗(yàn)
【貯存】： 貯存于2℃-8℃.如有需要，我們將竭城為顧客提供售前，售中，售后的*服務(wù)!
需要但未提供的材料
1. 可在450nm處進(jìn)行讀數(shù)的酶標(biāo)儀；
2. 能精確吸取10-200µL的移液器；
3. 可調(diào)多道（8）移液器（50－200µL）；
4. 供可調(diào)多道移液器使用的試劑存放槽；
5. 洗瓶或洗板機(jī)；
6. 蒸餾水或去離子水；
7. 1升的圓柱形量筒；
8. 移液器：1和（10或25 mL）；
9. 移液器槍頭；
10. 紙巾；
11. 計(jì)時(shí)器，用以監(jiān)控溫育步驟；
12. 處理池和消毒劑（例如：0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水）；
注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室
溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中
不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
保存： 貯藏于2-8°C。
標(biāo)本收集
1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織液標(biāo)本。
2. 室溫（20－25℃）下保存標(biāo)本不要超過8小時(shí)。2－10℃保存標(biāo)本，不超過48小時(shí)。如
耽擱的時(shí)間更長，請?jiān)?20℃或更低的溫度下保存標(biāo)本。標(biāo)本避免多次凍融，這樣可能會損失蛋白活性，產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
準(zhǔn)備工作
1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。
操作步驟
試劑盒應(yīng)平衡至室溫（20-25°C ）再試驗(yàn)。 取出所需反應(yīng)板。
1. 加入10ul標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)、10ul標(biāo)本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。
2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒，封
住板孔，室溫溫育 45分鐘。
3. 洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應(yīng)板（每孔內(nèi)加入350ul洗滌液），并去除水滴
（在厚疊吸水紙上拍干）；反復(fù)洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫溫育20分鐘。
5. 每孔加入100ul終止液（Stop Solution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD
值。
以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。
制洗液備用。
三．樣品收集、處理及保存
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2）細(xì)胞：
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3）血清：
在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5）體液：
包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6.）組織標(biāo)本：
切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。
樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
四．操作步驟
1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測樣品組。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標(biāo)準(zhǔn)品。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。
12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。
五．?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度。
六．注意事項(xiàng)
1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2）加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3）孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
4）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
5）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
七．保存條件及有效期
1.試劑盒保存：2-8℃
2.有效期：6個(gè)月
八．訂貨說明
1）賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持*；
2）為了確保買方產(chǎn)品在運(yùn)輸中的質(zhì)量，對有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運(yùn)輸。
3）收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題，買方需在收到貨物一個(gè)月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議，視為貨物符合其要求，賣方不付任何責(zé)任。
4）出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題，如破損等，買方應(yīng)在收貨后一個(gè)周內(nèi)提出。買方未按時(shí)提出異議，視為該產(chǎn)品合格。
本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量，并提供良好的售后服務(wù)，有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴，請?jiān)谑盏截浳锏?2天內(nèi)以書面形式提出，并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料，我們會及時(shí)派人解決。所有形式的賠償或退換于產(chǎn)品本身，不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒，均可享受免費(fèi)代測服務(wù)，并提供技術(shù)指導(dǎo)。
