購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | *0 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*20 |
| 包裝 | 100ul*20 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
sE-selectin 小鼠可溶性E選擇素 規(guī)格： 48T/96T
ENG/sCD105 小鼠可溶性Endoglin 規(guī)格： 48T/96T
Gzms-B 小鼠顆粒酶B 規(guī)格： 48T/96T
Gzms-A 小鼠顆粒酶A 規(guī)格： 48T/96T
EMAb 小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體 規(guī)格： 48T/96T
pANCA 小鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體 規(guī)格： 48T/96T
ACA 小鼠抗中性粒/中心體抗體 規(guī)格： 48T/96T
PCNA 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體 規(guī)格： 48T/96T
AT 小鼠抗* 規(guī)格： 48T/96T
PA-IgG/M/A 小鼠抗血小板抗體IgG/M/A 規(guī)格： 48T/96T
ACA-IgM 小鼠抗心磷脂抗體IgM 規(guī)格： 48T/96T
ACA-IgG 小鼠抗心磷脂抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T
ACA-IgA 小鼠抗心磷脂抗體IgA 規(guī)格： 48T/96T
AMA 小鼠抗心肌抗體 規(guī)格： 48T/96T
dsDNA 小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體 規(guī)格： 48T/96T
dsDNA 小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體 規(guī)格： 48T/96T
ASMA 小鼠抗平滑肌抗體 規(guī)格： 48T/96T
ATR 小鼠抗*受體 規(guī)格： 48T/96T
AT-Ⅲ 小鼠抗*Ⅲ抗體 規(guī)格： 48T/96T
AECA 小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
ADH/AVP 小鼠抗利尿激素/*加壓素 規(guī)格： 48
2-甲基-3-溴吡啶 38749-79-0
4-溴-2-氯苯胺 38762-41-3
丁二酸單甲酯(琥珀酸單甲酯) 3878-55-5
R(+)-alpha-甲基芐胺 3886-69-9
甲氧基乙酰氯 38870-89-2
N-羥乙基酞酰亞胺 3891-7-4
四丁基三* 38932-80-8
3-溴-5-乙?；拎?38940-62-4
2-噻吩乙酰氯 39098-97-0
3-氯-N-甲基芐胺 39191-07-6
1H-吡唑-3-甲醛 3920-50-1
左旋樟腦-10-磺酰氯 39262-22-1
2-氨基-5-溴苯甲腈 39263-32-6
氯鈉 3926-62-3
*0 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*20鄰溴三氟甲苯 392-83-6
3-三氟甲基-4-溴苯胺 393-36-2
5-溴-2-氟三氟甲苯 393-37-3
2-氨基-5-氟三氟甲苯 393-39-5
2,4-二氯嘧啶 3934-20-1
2,5,6-三溴-3-甲基吡啶 393516-82-0
鄰氟苯甲酰氯 393-52-2
Boc-L-*甲酯 4326-36-7
2-三氟甲基苯甲酸 433-97-6
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
