購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細胞價格并預約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | DH5α 感受態(tài)細胞 |
| 包裝 | 100ul*20 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
TF 豬組織因子 規(guī)格： 48T/96T
t-PA 豬組織型纖溶酶原激活劑 規(guī)格： 48T/96T
HIS 豬組胺 規(guī)格： 48T/96T
TGF-β1 豬轉化生長因子β1 規(guī)格： 48T/96T
MHCⅢ/SLAⅢ 豬主要組織相容性復合體Ⅲ類 規(guī)格： 48T/96T
MHCⅡ/SLAⅡ 豬主要組織相容性復合體Ⅱ類 規(guī)格： 48T/96T
DH5α 感受態(tài)細胞 TNF-α 豬腫瘤壞死因子α 規(guī)格： 48T/96T
ADP 豬脂聯(lián)素 規(guī)格： 48T/96T
Lp-α 豬脂蛋白α 規(guī)格： 48T/96T
apo-B100 豬載脂蛋白B100 規(guī)格： 48T/96T
apo-A1 豬載脂蛋白A1 規(guī)格： 48T/96T
AChRab 豬乙酰*受體抗體 規(guī)格： 48T/96T
ACh 豬乙酰* 規(guī)格： 48T/96T
IGFBP-3 豬胰島素樣生長因子結合蛋白3 規(guī)格： 48T/96T
IGF-2 豬胰島素樣生長因子2 規(guī)格： 48T/96T
IGF-1 豬胰島素樣生長因子1 規(guī)格： 48T/96T
INS 豬胰島素 規(guī)格： 48T/96T
OxLDL 豬氧化低密度脂蛋白 規(guī)格： 48T/96T
PDGF 豬血小板衍生生長因子 規(guī)格： 48T/96T
PAF 豬血小板活化因子 規(guī)格： 48T/96T
FDP 豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物 規(guī)格： 48T/96T
Fbg 豬血纖蛋白原 規(guī)格： 48T/96T
TM 豬血栓調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
NO 豬血清一氧化氮 規(guī)格： 48T/96T
VWF 豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子 規(guī)格： 48T/96T
氰胺 420-04-2
丙酮基膦酸二甲酯 4202-14-6
氯代(鄰氯)二苯基甲烷 42074-68-0
2-氨基-3-硝基吡啶 4214-75-9
2-氨基-5-硝基吡啶 4214-76-0
1,1,1-三氟丙酮 421-50-1
N-甲基羥胺鹽酸鹽 4229-44-1
2,3-二氫-5-氯吲哚酮 42348-86-7
beta-*乙酯鹽酸鹽 4244-84-2
氨基甲酸叔丁酯 4248-19-5
2,2',4'-三氯苯乙酮 4252-78-2
異丁酰醋酸甲酯 42558-54-3
叔丁基甲基馬來酸酯 42726-73-8
D-纈氨醇 4276-9-9
5-甲基異惡唑-4-甲酸 42831-50-5
吡啶-3-磺酰氯鹽酸鹽 42899-76-3
四丁基氟化銨 429-41-4
氯代特戊酰氯 4300-97-4
2,3-丁二酮 431-03-8
1,1-二溴-3,3,3-三氟丙酮 431-67-4
4,6-二氯-5-甲基嘧啶 4316-97-6
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
