購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實驗操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 |
| 包裝 | 100ul*50 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
GCK 人葡萄糖激酶 規(guī)格： 48T/96T
GPI 人葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶 規(guī)格： 48T/96T
SPA 人葡萄球菌蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
Tetanus Ab 人破傷風(fēng)抗體 規(guī)格： 48T/96T
ODF 人破骨細(xì)胞分化因子 規(guī)格： 48T/96T
Prednisolone 人*龍 規(guī)格： 48T/96T
SMM 人平滑肌肌球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Syk 人脾臟*激酶 規(guī)格： 48T/96T
CORT 人皮質(zhì)酮/腎上腺酮 規(guī)格： 48T/96T
Cortisol 人* 規(guī)格： 48T/96T
CLA 人皮膚淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原 規(guī)格： 48T/96T
SRF/IF 人皮膚反應(yīng)因子/炎性因子 規(guī)格： 48T/96T
DPT 人皮膚蛋白 規(guī)格： 48T/96T
CTACK/CCL27 人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子 規(guī)格： 48T/96T
FSA 人胚胎性硫糖蛋白抗原 規(guī)格： 48T/96T
CIAP 人牛小腸堿性磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T
FⅫ 人*Ⅻ 規(guī)格： 48T/96T
FⅩⅢ 人*ⅩⅢ 規(guī)格： 48T/96T
FⅩ 人*Ⅹ 規(guī)格： 48T/96T
FⅨ 人*Ⅸ 規(guī)格： 48T/96T
Ⅷ-Ag 人*Ⅷ相關(guān)抗
硫化銨 12135-76-1
XL10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50硼酸*酯 121-43-7
三乙胺 121-44-8
*氧基磷 121-45-9
1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵 12150-46-8
5-芐氧基吲哚 1215-59-4
3,4,5-三氟苯甲酸 121602-93-5
對乙酰胺基苯磺酰氯 121-60-8
N,N-二三異丙酯 121-69-7
3-羥基苯乙酮 121-71-1
2-氨基-5-硝基* 121-88-0
間硝基苯乙酮 121-89-1
間硝基苯甲酰氯 121-90-4
間硝基苯甲酸 121-92-6
4'-甲氧丙酮 121-97-1
4-甲氧基苯甲酸甲酯 121-98-2
對甲基苯乙酮 122-00-9
4-氯苯甲酰氯 122-01-0
4-異丙基環(huán)己醇 122-03-2
4-硝基苯甲酰氯 122-04-3
1,1,3,3-四乙氧基丙烷 122-31-6
二苯胺 122-39-4
原甲酸三乙酯 122-51-0
(R)-3-叔丁氧羰基氨基吡咯烷 122536-77-0
(S)-3-羥基吡咯烷鹽酸鹽 122536-94-1
苯亞甲基丙酮 122-57-6
苯氧乙酸 122-59-8
丙酸芐酯 122-63-4
1-BOC-吡咯烷-3-甲酰胺 122684-34-8
原 規(guī)格： 48T/96T
FⅢ 人*Ⅲ 規(guī)格： 48T/96T
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
