購買客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 |
| 包裝 | 100ul*50 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
PAPP-A 人妊相關(guān)血漿蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
SP1/PSβ1-G 人妊特異性β1糖蛋白 規(guī)格： 48T/96T
HG 人妊皰疹抗體 規(guī)格： 48T/96T
HSF-1 人熱休克因子1 規(guī)格： 48T/96T
HSP gp96 人熱休克蛋白糖蛋白96 規(guī)格： 48T/96T
HSP-90 人熱休克蛋白90 規(guī)格： 48T/96T
HSP-70 人熱休克蛋白70 規(guī)格： 48T/96T
Hsp-60 人熱休克蛋白60 規(guī)格： 48T/96T
HSP-40 人熱休克蛋白40 規(guī)格： 48T/96T
HSP-27 人熱休克蛋白27 規(guī)格： 48T/96T
HSP-20 人熱休克蛋白20 規(guī)格： 48T/96T
IMA 人缺血修飾白蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ALD 人醛縮酶 規(guī)格： 48T/96T
ALD 人醛固酮 規(guī)格： 48T/96T
i-PTH 人全段甲狀旁腺素 規(guī)格： 48T/96T
ASGPR 人去唾液酸糖蛋白受體 規(guī)格： 48T/96T
NA 人* 規(guī)格： 48T/96T
FK 人趨化因子 規(guī)格： 48T/96T
鄰甲基苯甲酸 118-90-1
鄰氨甲酸 118-92-3
XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*502'-羥基苯乙酮 118-93-4
氯磺酰異氰酸酯 1189-71-5
環(huán)丁酮 1191-95-3
2,3-二氫呋喃 1191-99-7
1-甲基-5-氨基吡唑 1192-21-8
2-溴甲基四氫 1192-30-9
2-乙?；秽?1192-62-7
2,4-二硝基苯肼 119-26-6
4-氨基苯硫酚 1193-02-8
4,6-二氯嘧啶 1193-21-1
4-甲基-3-硝基苯胺 119-32-4
4,6-二羥基嘧啶 1193-24-4
* 119-36-8
對(duì)氟苯腈 1194-02-1
二苯甲酮 119-61-9
1,2,3,4-四氫萘 119-64-2
異喹啉 119-65-3
吲哚-6-甲醛 1196-70-9
鄰羧基環(huán)己醇 119-67-5
對(duì)氨基并咪唑 1197-55-3
5-溴-8-羥基喹啉 1198-14-7
S-3-氨基奎寧環(huán)胺鹽酸鹽 119904-90-4
對(duì)溴肉桂酸 1200-07-3
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
