購買客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 |
| 包裝 | 100ul*50 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
FSH 人促卵泡素 規(guī)格： 48T/96T
TRH 人促甲狀腺素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T
TSH 人促甲狀腺素 規(guī)格： 48T/96T
TSHR 人促甲狀腺激素受體抗體 規(guī)格： 48T/96T
LH * 規(guī)格： 48T/96T
人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 規(guī)格： 48T/96T
E3 人雌三醇 規(guī)格： 48T/96T
E 人雌激素 規(guī)格： 48T/96T
ER 人雌二醇受體 規(guī)格： 48T/96T
E2 人雌二醇 規(guī)格： 48T/96T
PACAP 人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽 規(guī)格： 48T/96T
VMA 人垂草扁桃酸 規(guī)格： 48T/96T
PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規(guī)格： 48T/96T
PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規(guī)格： 48T/96T
VLA 人遲現(xiàn)抗原 規(guī)格： 48T/96T
VLA 人遲現(xiàn)抗原 規(guī)格： 48T/96T
MPF 人成熟促進(jìn)因子 規(guī)格： 48T/96T
OGP 人成骨生長(zhǎng)肽 規(guī)格： 48T/96T
SOD 人超氧化物歧化酶 規(guī)格： 48T/96T
DH10Bac 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50hs-CRP 人超敏C反應(yīng)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Sag 人超抗原 規(guī)格： 48T/96T
iFABP 人腸脂肪酸結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Enterovirus 人腸病毒 規(guī)格： 48T/96T
LATS 人*甲狀腺刺激素 規(guī)格： 48T/96T
OPAs 人不透光相關(guān)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
LTB 人不耐熱腸毒素B亞單位 規(guī)格： 48T/96T
LTB 人不耐熱腸毒素B亞單位 規(guī)格： 48T/96T
ADMA 人不對(duì)稱二甲基* 規(guī)格： 48T/96T
ADMA 人不對(duì)稱二甲基* 規(guī)格： 48T/96T
CFH 人補(bǔ)體因子H 規(guī)格： 48T/96T
C5b 人補(bǔ)體片斷5b 規(guī)格： 48T/96T
C5b 人補(bǔ)體片斷5b 規(guī)格： 48T/96T
C5a 人補(bǔ)體片斷5a 規(guī)格： 48T/96T
C4b 人補(bǔ)體片斷4b 規(guī)格： 48T/96T
C4b 人補(bǔ)體片斷4b 規(guī)格： 48T/96T
C3b 人補(bǔ)體片斷3b 規(guī)格： 48T/96T
C3b 人補(bǔ)體片斷3b 規(guī)格： 48T/96T
C3a 人補(bǔ)體片斷3a 規(guī)格： 48T/96T
C3bR 人補(bǔ)體片段3b受體 規(guī)格： 48T/96T
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
