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| 產品名稱 | SURE 電擊感受態(tài)細胞 50ul*20 |
| 包裝 | 50ul*20 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Tn-Ⅰ 人肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T
FⅫa 人活化*Ⅻ 規(guī)格： 48T/96T
APCR 人活化蛋白C抵抗素 規(guī)格： 48T/96T
APC 人活化蛋白C 規(guī)格： 48T/96T
LHRH 人黃體生成素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T
cAMP 人* 規(guī)格： 48T/96T
cGMP 人環(huán)磷酸鳥苷 規(guī)格： 48T/96T
COX-2 人環(huán)加氧酶2 規(guī)格： 48T/96T
CsA 人*A 規(guī)格： 48T/96T
talin 人踝蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ALOX-5 人花生四烯酸5脂加氧酶 規(guī)格： 48T/96T
AA 人花生四烯酸 規(guī)格： 48T/96T
EPOR 人紅細胞生成素受體 規(guī)格： 48T/96T
EPO 人紅細胞生成素 規(guī)格： 48T/96T
EMP 人紅細胞膜蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ESF 人紅細胞刺激因子 規(guī)格： 48T/96T
sm Actinin-α 人橫紋肌輔肌動蛋白α 規(guī)格： 48T/96T
MLZE 人黑素瘤衍生*拉鏈額外核因子 規(guī)格： 48T/96T
MC Ab 人黑色素細胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
MSH 人黑色素細胞刺激素 規(guī)格： 48T/96T
MMSAM 人黑色素瘤轉移表面黏附分子 規(guī)格： 48T/96T
SURE 電擊感受態(tài)細胞 50ul*20 MAGE 人黑色素瘤相關抗原 規(guī)格
2-氯茴香硫醚 17733-22-1
X2'-溴苯乙酮 2142-69-0
(1S,2S)-(+)-1,2-環(huán)己二胺 21436-03-3
4-氨基苯硼酸頻哪醇酯 214360-73-3
2,4-二羥基苯甲酸甲酯 2150-47-2
鄰甲氧基苯甲酰氯 21615-34-9
4-甲氧基-2-氧代-1,2-二氫-3-氰基吡啶 21642-98-8
* 21645-51-2
(S)-3-Boc-氨基哌啶 216854-23-8
2-氨基-5-氟吡啶 21717-96-4
： 48T/96T
注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
