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| 產(chǎn)品名稱(chēng) | BJ5183 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 |
| 包裝 | 100ul*10 |
| 分類(lèi) | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
shēng huà shì jì 組蛋白H1（小牛胸腺） 容量： 5克
shēng huà shì jì 組蛋白A（小牛胸腺） 容量： 5克
shēng huà shì jì 組蛋白 容量： 25克
shēng huà shì jì 組胺二鹽 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 組胺 容量： 100克
shēng huà shì jì 總脂酶測(cè)試盒【脂蛋白脂酶(LPL) 容量： RT 1000支/包
shēng huà shì jì 總鐵結(jié)合力測(cè)試盒 容量： RT 96支/盒
shēng huà shì jì 總巰基測(cè)試盒 容量： 10支/把
shēng huà shì jì 總抗氧化能力測(cè)試盒 容量： RT 20個(gè)/包
shēng huà shì jì 總蛋白定量測(cè)試盒（考馬斯亮蘭法） 容量： RT 96支/盒
shēng huà shì jì 總*、直接*測(cè)試盒 容量： 1個(gè)
shēng huà shì jì 總氨基酸測(cè)試盒 容量： RT 個(gè)
shēng huà shì jì 棕櫚油酸甲酯 容量：
shēng huà shì jì 棕櫚油酸 容量： 1克
shēng huà shì jì 紫脲酸銨 容量： 5克
shēng huà shì jì 紫脲酸 容量： 20毫升
shēng huà shì jì 仔副菌生產(chǎn)培養(yǎng)基 容量： RT 支
shēng huà shì jì 轉(zhuǎn)移核糖核酸（酵母） 容量：
CCP 人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
C4 人補(bǔ)體蛋白4 規(guī)格： 48T/96T
C3 人補(bǔ)體蛋白3 規(guī)格： 48T/96T
C7 人補(bǔ)體7 規(guī)格： 48T/96T
C3SP 人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物 規(guī)格： 48T/96T
C1INH 人補(bǔ)體1抑制物抗體 規(guī)格： 48T/96T
VN/CD51+CD61 人玻連蛋白/體外粘連蛋白 規(guī)格： 48T/96T
VIM 人波形蛋白 規(guī)格： 48T/96T
HCV-IgM 人丙型肝炎IgM 規(guī)格： 48T/96T
HCV-IgG 人丙型肝炎IgG 規(guī)格： 48T/96T
BJ5183 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 M2-PK 人丙酮酸激酶M2型同工酶 規(guī)格： 48
25克
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
