購(gòu)買客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購(gòu)的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說(shuō)明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | MC1061F- 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 |
| 包裝 | 100ul*10 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
shēng huà shì jì * 容量： 5克
shēng huà shì jì 碳酸環(huán)己胺 容量： 10克
shēng huà shì jì 碳酸胍 容量： 500毫克
shēng huà shì jì 碳酸鈷 容量： 100克
shēng huà shì jì 碳酸鎘 容量： RT 25毫克
shēng huà shì jì 碳酸酐酶（牛紅血球） 容量： 25克
shēng huà shì jì 碳酸釓 容量： 25克
shēng huà shì jì 碳酸丙二醇酯 容量： 保存：-20℃ 50毫克
shēng huà shì jì 碳酸鋇 容量： 25克
MC1061F- 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10shēng huà shì jì 碳酸銨 容量： 100克
shēng huà shì jì 碳化鎢 容量： RT 5克
shēng huà shì jì 碳化硼 容量： RT，避光 5克
shēng huà shì jì 碳化硅 容量： RT 1克
shēng huà shì jì 炭疽桿菌診斷抗原 容量： 1米
shēng huà shì jì 炭疽桿菌疫苗 容量： 1米
shēng huà shì jì 炭疽桿菌噬菌體 容量： 1米
shēng huà shì jì 炭疽桿菌沉淀血清 容量： 1米
shēng huà shì jì 鉭片 容量： 避光，-20℃ 5克
shēng huà shì jì 鉭粒 容量： 25克
VA 大鼠* 規(guī)格： 48T/96T
omentin 大鼠網(wǎng)膜素 規(guī)格： 48T/96T
AGEs 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物 規(guī)格： 48T/96T
DPD 大鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉 規(guī)格： 48T/96T
DHEA-S 大鼠脫氫表雄酮硫酸酯 規(guī)格： 48T/96T
HABP 大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
HA 大鼠透明質(zhì)酸 規(guī)格： 48T/96T
FE 大鼠鐵蛋白 規(guī)格： 48T/96T
GP-MM 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM 規(guī)格： 48T/96T
GP-II 大鼠糖原磷酸化酶同工酶II 規(guī)格： 48T/96T
GP-BB 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB 規(guī)格： 48T/96T
GSK 大鼠糖原合成酶激酶 規(guī)格： 48T/96T
CDT 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白 規(guī)格： 48T/96T
GR 大鼠糖皮質(zhì)類固醇受體 規(guī)格： 48T/96T
GHbA1c 大鼠糖化血紅蛋白A1c 規(guī)格： 48T/96T
gp130 大鼠糖蛋白130 規(guī)格： 48T/96T
shēng huà shì jì 鈦鐵試劑 容量： RT，避光 10克
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
