購買客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 |
| 包裝 | 100ul*50 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
TM 兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
PAI-1 兔子纖溶酶原激活物抑制因子1 規(guī)格： 48T/96T
PAI 兔子纖溶酶原激活物抑制因子 規(guī)格： 48T/96T
ICAM-3/CD50 兔子細(xì)胞間粘附分子3 規(guī)格： 48T/96T
ICAM-2/CD102 兔子細(xì)胞間粘附分子2 規(guī)格： 48T/96T
ICAM-1/CD54 兔子細(xì)胞間粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
DPD 兔子脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉 規(guī)格： 48T/96T
DHEA-S 兔子脫氫表雄酮硫酸酯 規(guī)格： 48T/96T
HA 兔子透明質(zhì)酸 規(guī)格： 48T/96T
MBP 兔子髓磷脂堿性蛋白 規(guī)格： 48T/96T
RBP-4 兔子*結(jié)合蛋白4 規(guī)格： 48T/96T
GHRP 兔子生長激素釋放多肽 規(guī)格： 48T/96T
ADM 兔子腎上腺髓質(zhì)素 規(guī)格： 48T/96T
NT-4 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4 規(guī)格： 48T/96T
NT-3 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3 規(guī)格： 48T/96T
NSE 兔子神經(jīng)特異性烯醇化酶 規(guī)格： 48T/96T
NGF 兔子神經(jīng)生長因子 規(guī)格： 48T/96T
GFAP 兔子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 PGE2 兔子前列腺素E2 規(guī)格： 48T/96T
PGE1 兔子前列腺素E1 規(guī)格： 48T/96T
GIP 兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽 規(guī)格： 48T/96T
CORT 兔子皮質(zhì)酮/腎上腺酮 規(guī)格： 48T/96T
Cortisol 兔子* 規(guī)格： 48T/
hēng huà shì jì 液體改良馬丁培養(yǎng)基 容量： 250毫升
shēng huà shì jì *測定培養(yǎng)基 容量： 50張/盒
shēng huà shì jì *鹽 容量： 25克
shēng huà shì jì 葉綠素B 容量： 100克
shēng huà shì jì 葉綠素A 容量： 2～8℃ 5克
shēng huà shì jì 耶爾森氏菌顯色培養(yǎng)基 容量： RT 支
shēng huà shì jì 氧氯化鋯 容量： 100克
shēng huà shì jì 氧化鍺 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 氧化銪 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 氧化銀 容量： RT，避光 5克
shēng huà shì jì 氧化釔 容量： 100毫克
shēng huà shì jì 氧化亞銅 容量： 500克
shēng huà shì jì 氧化型輔酶Ⅱ 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 氧化型輔酶Ⅰ 容量： 100克
shēng huà shì jì 氧化銅絲 容量： 100克
shēng huà shì jì 氧化銅粒 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 氧化銅粉 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 氧化鐵 容量： 25克
shēng huà shì jì 氧化鈰 容量： 25克
shēng huà shì jì 氧化釤 容量： 25克
96T
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
