購買客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 |
| 包裝 | 100ul*10 |
| 分類 | 克隆感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
IgE 豚鼠免疫球蛋白E 規(guī)格： 48T/96T
IgA 豚鼠免疫球蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
OVA sIgG 豚鼠卵清蛋白特異性IgG 規(guī)格： 48T/96T
OVA sIgE 豚鼠卵清蛋白特異性IgE 規(guī)格： 48T/96T
CGRP 豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽 規(guī)格： 48T/96T
TIMP-1 豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1 規(guī)格： 48T/96T
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10MMP-9 豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9 規(guī)格： 48T/96T
LPO 豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶 規(guī)格： 48T/96T
Lebtospira 豚鼠鉤端螺旋體IgG 規(guī)格： 48T/96T
HGF 豚鼠肝細(xì)胞生長因子 規(guī)格： 48T/96T
TE 豚鼠端粒酶 規(guī)格： 48T/96T
MCP-4/CCL13 豚鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4 規(guī)格： 48T/96T
FSH 豚鼠促卵泡素 規(guī)格： 48T/96T
SOD 豚鼠超氧化物歧化酶 規(guī)格： 48T/96T
iFABP 豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
EGF 豚鼠表皮生長因子 規(guī)格： 48T/96T
LTD4 豚鼠白三烯D4 規(guī)格： 48T/96T
LTB4 豚鼠白三烯B4 規(guī)格： 48T/96T
IL-4 豚鼠白介素4 規(guī)格： 48T/96T
IL1Ra 豚鼠白介素1受體拮抗劑 規(guī)格： 48T/96T
IL-12/P70 豚鼠白介素12 規(guī)格： 48T/
shēng huà shì jì *（牛胰） 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 胰蛋白胨水 容量： 100克
shēng huà shì jì 胰蛋白胨膽鹽瓊脂 容量： 100毫升
shēng huà shì jì 胰蛋白胨大豆肉湯 容量： 100克
shēng huà shì jì 胰蛋白胨大豆瓊脂 容量： 50張/盒
shēng huà shì jì 胰蛋白胨 容量： RT 1克
shēng huà shì jì 胰膘肉湯基礎(chǔ) 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 銥海棉 容量： 10克
shēng huà shì jì 銥粉 容量： 5克
shēng huà shì jì 依托* 容量： RT 5克
shēng huà shì jì 依斯卡合劑 容量： 200U
shēng huà shì jì 依來鉻氰藍(lán)R 容量： 500KU
shēng huà shì jì 衣康酸 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 伊文斯藍(lán) 容量： RT，避光 5克
shēng huà shì jì 伊紅染液 容量： 10片/箱
shēng huà shì jì 伊紅美蘭瓊脂平板 容量： 1米
shēng huà shì jì 伊紅美蘭瓊脂 容量： 250克
shēng huà shì jì 一氧化錫 容量： 25克
shēng huà shì jì 一氧化硅 容量： 25克
96T
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
