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產(chǎn)品名稱 | GV3101(pSoup-19) 感受態(tài)細胞 100ul*10 |
包裝 | 100ul*10 |
分類 | 表達感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
sCD40L 人可溶性白細胞分化抗原40配體 規(guī)格: 48T/96T
sCD30L 人可溶性白細胞分化抗原30配體 規(guī)格: 48T/96T
sCD28 人可溶性白細胞分化抗原28 規(guī)格: 48T/96T
sP-selectin 人可溶性P選擇素 規(guī)格: 48T/96T
sE-selectin 人可溶性E選擇素 規(guī)格: 48T/96T
ENG/sCD105 人可溶性Endoglin 規(guī)格: 48T/96T
sCD44-v9 人可溶性CD44變體9 規(guī)格: 48T/96T
sCD146 人可溶性CD146分子 規(guī)格: 48T/96T
granulysin 人顆粒溶素 規(guī)格: 48T/96T
Gzms-B 人顆粒酶B 規(guī)格: 48T/96T
GV3101(pSoup-19) 感受態(tài)細胞 100ul*10 Gzms-A 人顆粒酶A 規(guī)格: 48T/96T
Cox V-IgM 人柯薩奇病毒IgM 規(guī)格: 48T/96T
Cox V-IgG 人柯薩奇病毒IgG 規(guī)格: 48T/96T
AHA 人抗組蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
H2A-H2B 人抗組蛋白 規(guī)格: 48T/96T
EMAb 人抗子宮內(nèi)膜抗體 規(guī)格: 4
shēng huà shì jì 二苯基聯(lián)苯胺 容量: 2~8℃ 10毫升
shēng huà shì jì 二苯基甲烷 容量: 0.25毫升
shēng huà shì jì 二苯基甲醇 容量: 保存:-20℃ 50毫克
shēng huà shì jì 二苯胍 容量: 保存:-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì 二苯砜 容量: RT 25克
shēng huà shì jì 二苯胺磺酸鈉 容量: 2~8℃ 100毫克
shēng huà shì jì 二苯胺磺酸鋇 容量: 2~8℃ 10毫升
shēng huà shì jì 二苯胺 容量: 10毫升
shēng huà shì jì 二*甲烷 容量: 保存:-20℃ 50毫克
shēng huà shì jì 蒽酮 容量: 100毫克
shēng huà shì jì 蒽醌-2-磺酸鈉 容量: RT 1毫克
shēng huà shì jì 蒽醌 容量: 5毫升
shēng huà shì jì 蒽聰 容量: 100克
shēng huà shì jì * 容量: RT 5克
shēng huà shì jì 苊醌 容量: 1公斤
shēng huà shì jì 鋨粉 容量: RT 25克
shēng huà shì jì 多效唑 容量: 1公斤
shēng huà shì jì 多項目尿液化學分析控制品 容量: 100張/盒
shēng huà shì jì 多聚左旋賴氨酸 容量: RT 10克
shēng huà shì jì 多聚右旋賴氨酸 容量: 25克
shēng huà shì jì 多聚磷酸鈉 容量: 500毫克
shēng huà shì jì 多聚甲醛 容量: 1公斤
shēng huà shì jì 多聚半乳糖醛酸鈉 容量: 25克
shēng huà shì jì 多聚半乳糖醛酸 容量: 100克
shēng huà shì jì 多價蛋白胨-酵母膏培養(yǎng)基 容量: 100克
shēng huà shì jì 多價蛋白胨 容量: 100克
shēng huà shì jì 多酚氧化酶(菌菇) 容量: 2~8℃,避光 1克
8T/96T
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。