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產品名稱 | GV3101(pSoup) 感受態(tài)細胞 100ul*50 |
包裝 | 100ul*50 |
分類 | 表達感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
OVA sIgE
PaCoA 人磷酸化乙酰* 規(guī)格: 48T/96T
pERK 人磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶 規(guī)格: 48T/96T
P-PKC 人磷酸化蛋白激酶C 規(guī)格: 48T/96T
PGAM2 人磷酸甘油酸變位酶2 規(guī)格: 48T/96T
人淋巴細胞因子ELISA Kit,48T/96T 人淋巴細胞因子ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
Lptn/LTN/XCL1 人淋巴細胞趨化因子 規(guī)格: 48T/96T
LFA-3/CD58 人淋巴細胞功能相關抗原3 規(guī)格: 48T/96T
LFA-2/CD2 人淋巴細胞功能相關抗原2 規(guī)格: 48T/96T
LFA-1/CD11a+CD18 人淋巴細胞功能相關抗原1 規(guī)格: 48T/96T
LTB 人淋巴毒素β 規(guī)格: 48T/96T
LTA 人淋巴毒素α 規(guī)格: 48T/96T
LAP 人亮氨酰氨基肽酶 規(guī)格: 48T/96T
SK 人鏈激酶 規(guī)格: 48T/96T
人痢疾內阿米巴抗原ELISA Kit,48T/96T 人痢疾內阿米巴抗原ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
GS-ANA 人粒細胞特異性抗核抗體 規(guī)格: 48T/96T
GCP-2/CXCL6 人粒細胞趨化蛋白-2 規(guī)格: 48T/96T
GM-CSF Ab 人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子抗體 規(guī)格: 48T/96T
GM-CSF 人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子 規(guī)格: 48T/96T
G-CSF 人粒細胞集落刺激因子 規(guī)格: 48T/96T
KP 人利鉀尿肽 規(guī)格: 48T/96T
CG 人冷球蛋白 規(guī)格:shēng huà shì jì 固綠FCF 容量: 1公斤
GV3101(pSoup) 感受態(tài)細胞 100ul*50shēng huà shì jì 固藍RR鹽 容量: 5毫克
shēng huà shì jì 固藍B鹽 容量: 1公斤
shēng huà shì jì 固藍BB鹽 容量: 保存:-20℃ 2毫克
shēng huà shì jì 固紅片劑 容量: 25克
shēng huà shì jì 固紅TR 容量: 5克
shēng huà shì jì 固紅RC 容量: 100克
shēng huà shì jì 固紅GG鹽 容量: 1克
shēng huà shì jì 固B鹽 容量: 2~8°C 50毫克
shēng huà shì jì 鈷粉 容量: 100克
shēng huà shì jì 鈷 容量: 保存:-20℃
48T/96T
注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。