購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | AGL1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 |
| 包裝 | 100ul*10 |
| 分類 | 根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
FDA 人果糖1,6二磷酸醛縮酶 規(guī)格： 48T/96T
P-CK 人廣譜細(xì)胞角蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Casp-9 人胱天蛋白酶9 規(guī)格： 48T/96T
Casp-3 人胱天蛋白酶3 規(guī)格： 48T/96T
Casp-12 人胱天蛋白酶12 規(guī)格： 48T/96T
oligomeric 人寡聚蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ON 人骨粘連蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BMP-6 人骨形成蛋白6 規(guī)格： 48T/96T
BMPs 人骨形成蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BSP 人骨涎蛋白 規(guī)格： 48T/96T
AGL1 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 CTX-2 人骨退化特異標(biāo)志物 規(guī)格： 48T/96T
ALP-B 人骨特異性堿性磷酸酶B 規(guī)格： 48T/96T
MPIF-1/CCL23 人骨髓抑制因子1 規(guī)格： 48T/96T
OPN 人骨橋素 規(guī)格： 48T/96T
Cr 人骨膠原交聯(lián) 規(guī)格： 48T/96T
BALP 人骨堿性磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T
OT/BGP 人骨鈣素/骨*蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BMPR-Ⅱ 人骨成型蛋白受體Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
BMPR-1A 人骨成型蛋白受體1A 規(guī)
shēng huà shì jì 苯*脫羧酶培養(yǎng)基 容量： RT 10克
shēng huà shì jì 苯*試劑 容量： 1米
shēng huà shì jì 苯胺鹽酸鹽 容量： 20毫升
shēng huà shì jì 苯胺藍(lán)（水溶） 容量： 25克
shēng huà shì jì 鋇 容量： 25克
shēng huà shì jì 貝爾德-帕克瓊脂 容量： 100毫升
shēng huà shì jì 北沙參亞碲酸鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ) 容量： RT 250克
shēng huà shì jì 寶石紅蛋白染色試劑 容量： 5克
shēng huà shì jì 寶石紅550 容量： 25克
shēng huà shì jì 寶石橙蛋白染色試劑 容量： 2～8℃ 25克
shēng huà shì jì 胞嘧啶 容量： 25克
shēng huà shì jì 胞苷 容量： 100克
shēng huà shì jì 苞肉培養(yǎng)基基礎(chǔ) 容量： 100毫升
shēng huà shì jì 苞肉粒 容量： 1米
shēng huà shì jì 半纖維素酶 容量： 25克
shēng huà shì jì 半乳糖氧化酶 容量： 100克
格： 48T/96T
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
