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| 產品名稱 | K599 電擊感受態(tài)細胞 50ul*10 |
| 包裝 | 50ul*10 |
| 分類 | 發(fā)根農桿菌感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
shēng huà shì jì 草酸高鐵銨 容量： 2～8℃ 1克
shēng huà shì jì 草酸鈣 容量： RT 100毫克
shēng huà shì jì 草酸二乙酯 容量： 500克
shēng huà shì jì 草酸銨 容量： 25克
shēng huà shì jì 草酸 容量： 25克
shēng huà shì jì 藏紅T 容量： 5克
shēng huà shì jì 燦爛甲酚藍 容量： 2～8°C 25克
shēng huà shì jì 蠶蛹蛋白胨 容量： 保存：-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì 布氏肉湯 容量： 25毫升
shēng huà shì jì 布氏瓊脂 容量： 2～8℃ 25毫升
shēng huà shì jì 布氏菌選擇性培養(yǎng)基 容量： 50張/盒
shēng huà shì jì 布魯諾廣譜高效殺菌劑 容量： 5克
shēng huà shì jì 鉑絲 容量： 500毫克
shēng huà shì jì 鉑片 容量： 保存：-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì * 容量： RT 10克
shēng huà shì jì 玻璃
大鼠骨粘連蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BMP-6 大鼠骨形成蛋白6 規(guī)格： 48T/96T
BMPs 大鼠骨形成蛋白 規(guī)格： 48T/96T
ALP-B 大鼠骨特異性堿性磷酸酶B 規(guī)格： 48T/96T
OPN 大鼠骨橋素 規(guī)格： 48T/96T
Cr 大鼠骨膠原交聯(lián) 規(guī)格： 48T/96T
OT/BGP 大鼠骨鈣素/骨*蛋白 規(guī)格： 48T/96T
BMPR-Ⅱ 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
K599 電擊感受態(tài)細胞 50ul*10 BMPR-1A 大鼠骨成型蛋白受體1A 規(guī)格： 48T/96T
BMP-7 大鼠骨成型蛋白7 規(guī)格： 48T/96T
BMP-4 大鼠骨成型蛋白4 規(guī)格： 48T/96T
BMP-2 大鼠骨成型蛋白2 規(guī)格： 48T/96T
OPGL 大鼠骨保護素配體 規(guī)格： 48T/96T
OPG 大鼠骨保護素 規(guī)格： 48T/96T
GAD-Ab 大鼠*脫羧酶自身抗體 規(guī)格： 48T/96T
2～8℃ 5克
shēng huà shì jì 玻璃纖維 容量： 100克
注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
