購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細胞價格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。產(chǎn)品僅用于科研
| 產(chǎn)品名稱 | K599 感受態(tài)細胞 100ul*50 |
| 包裝 | 100ul*50 |
| 分類 | 發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
shēng huà shì jì 甲基紅鈉 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 甲基紅 容量： 250克
shēng huà shì jì 甲基硅油 容量： RT 5克
shēng huà shì jì 甲基橙 容量： 5毫克
shēng huà shì jì 甲基丙烯酸甲酯 容量： 25克
shēng huà shì jì 甲基百里酚藍 容量： 1克
shēng huà shì jì 甲基白蛋白 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 甲基-β-環(huán)糊精 容量： 100克
shēng huà shì jì 甲基-α-D-吡喃半乳糖苷 容量： 100克
shēng huà shì jì 甲泛葡胺 容量： 25克shēng huà sh
shēng huà shì jì 硅藻土G 容量： 25克
shēng huà shì jì 硅藻土 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 硅油 容量： 25克
K599 感受態(tài)細胞 100ul*50shēng huà shì jì 硅鎢
MMP-13 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13 規(guī)格： 48T/96T
MMP-10 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10 規(guī)格： 48T/96T
MMP-1 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1 規(guī)格： 48T/96T
Myosin 大鼠肌球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MYO/MB 大鼠肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MYO/MB 大鼠肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Tn-Ⅰ 大鼠肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T
ACV-RAb 大鼠活化素A受體抗體 規(guī)格： 48T/96T
Activin-A 大鼠活化素A 規(guī)格： 48T/96T
APC 大鼠活化蛋白C 規(guī)格： 48T/96T
LHRH 大鼠黃體生成素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T
cAMP 大鼠* 規(guī)格： 48T/96T
量： 2～8℃，避光 10克
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。
