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| 產(chǎn)品名稱 | MSU440 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*50 |
| 包裝 | 50ul*50 |
| 分類 | 發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
shēng huà shì jì 堿藍(lán)6B 容量： 1克
shēng huà shì jì 間硝基苯胺 容量： 100u
shēng huà shì jì 間羥基苯甲酸 容量： 10克
shēng huà shì jì 間甲基紅 容量： 100克
shēng huà shì jì 間甲酚紫 容量： 250毫克
shēng huà shì jì 間甲苯甲酸 容量： 25毫克
shēng huà shì jì 間二甲苯 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 間苯二甲酸二烯丙酯 容量： 保存：-20℃ 5毫升
shēng huà shì jì 間苯二甲酸 容量： 100克
shēng huà shì jì 間氨基苯甲酸 容量： 10克
shēng huà shì jì 假單胞菌瓊脂P基礎(chǔ) 容量： 500克
shēng huà shì jì 假單胞菌瓊脂F(xiàn)基礎(chǔ) 容量： 2～8℃ 100毫升
shēng huà shì jì 假單胞分離肉湯 容量： 200張/盒
shēng huà shì jì 假單胞分離瓊脂 容量： RT，避光 25克
shēng huà shì jì 鉀測(cè)試盒
CT 大鼠降鈣素 規(guī)格： 48T/96T
ALP 大鼠堿性磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T
bFGF-9 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9 規(guī)格： 48T/96T
bFGF-6 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6 規(guī)格： 48T/96T
bFGF-4 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4 規(guī)格： 48T/96T
bFGF 大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T
TAb 大鼠甲狀腺素抗體 規(guī)格： 48T/96T
T4 大鼠甲狀腺素 規(guī)格： 48T/96T
MSU440 電擊感受態(tài)細(xì)胞 50ul*50 TG 大鼠甲狀腺球蛋白 規(guī)格： 48T/96T
TPO 大鼠甲狀腺過(guò)氧化物酶 規(guī)格： 48T/96T
PTHrP 大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
PTH 大鼠甲狀旁腺激素 規(guī)格： 48T/96T
AFP 大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白 規(guī)格： 48T/96T
） 容量： RT 100支/盒
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
