測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6655 |
商品介紹
測定意義 磷脂酶D(EC3.1.4.4)即磷脂酰水解酶,是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱,廣泛存在于高等動植物和細菌等多種生物體中,具有參與細胞脂質(zhì)代謝、信號傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。 測定原理 磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和,在氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),在500nm處有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計、微量石英比色皿、恒溫水浴鍋,無水乙醇。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
② 細菌/細胞樣本:
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。
胞內(nèi)活化的Notch1蛋白抗體Human CD25(Interleukin 2 Receptor Alpha) ELISA Kit大鼠載脂蛋白Helisa檢測試劑盒說明書
神經(jīng)鈣傳感蛋白1抗體Human CD32(Receptor II for the Fc Fragment of IgG) ELISA Kit大鼠基質(zhì)金屬蛋白3elisa檢測試劑盒多少錢
神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體Human GP4(Plaet Membrane Glycoprotein IV) ELISA Kit大鼠基質(zhì)金屬蛋白13elisa檢測試劑盒品牌
膜相關(guān)蛋白樣蛋白NUMBL抗體Human CCDC3(Coiled-coil domain-containing protein 3) ELISA Kit大鼠6酮前列腺素elisa檢測試劑盒多少錢
嘌呤霉素敏感性氨肽蛋白抗體Human CD40L(Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit大鼠L選擇素elisa檢測試劑盒品牌
N-乙基順二酰亞敏感融合蛋白抗體Human CD80(T-lymphocyte activation antigen CD80) ELISA Kit小鼠白介素2受體elisa檢測試劑盒哪里有買
NIPAL2蛋白抗體Human CD56(Neural Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit大鼠白三烯C4elisa檢測試劑盒多少錢
神經(jīng)營養(yǎng)因子HNT抗體Human CD13(Aminopeptidase N) ELISA Kit大鼠elisa檢測試劑盒哪里有買
磷脂酶D(PLD)微量法檢測試劑盒桉葉油 99%Anti-Cyclin F 周期素F抗體人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1 Ab IgA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
桉葉油 萜GC標(biāo)準(zhǔn)品 ,>99.5% (GC)Anti-Cyclin G 周期素G抗體人II型前膠原羧端原肽(PIICP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
桉葉油 ≥99%, FCCAnti-Cyclin H 周期素H抗體人β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4-乙愈創(chuàng)木酚 99%Anti-Cystatin 3/CST3 胱抑素C/半胱氨蛋白抑制劑C抗體人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
4-乙愈創(chuàng)木酚 ≥98%, FCC, FGAnti-Cytoglobin 球蛋白抗體人原鈣黏素γA2(PCDHγA2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙麥芽酚 99%Anti-CYLD 微管結(jié)合蛋白CYLD抗體人半糖苷β(GLβ)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙麥芽酚 99%, FCC, FGAnti-phospho-CYLD(Ser418) 化微管結(jié)合蛋白CYLD抗體人甘露糖苷α1A類成員1(MAN1A1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙酰乙酯 99%Anti-CYP1A1 色素P450 1A1抗體人β-促脂素(β-LPH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2-丁乙酯 98%Anti-P450 1A2/CYP1A2 色素P450 1A2抗體人β淀粉樣前體蛋白(βAPP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
乙酯 98%Anti-CYP11A1/P450SCC 色素P450 11A1抗體人防御素β1(DEFB1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
反-3-己烯乙酯 98%Anti-CYP2C9 色素P450 2C9抗體人防御素β2(DEFβ2/DEFB2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
呋喃酮 98%Anti-CYP3A4 色素P450 3A4抗體人β甘露糖苷(β Manase)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
呋喃酮 ≥98%, FCC, FGAnti-CYP2D6 色素P450 2D6抗體人β肌動蛋白(β-actin)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
呋喃酮 natural, ≥98%, FGAnti-CYP19 色素P450 19抗體人半胱氨酰白三烯受體1(CYSLTR1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
檸檬 97%Anti-CYP8A1/PTGIS 前列環(huán)素合成抗體人內(nèi)酰β(LACTβ)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒