選擇ELISA試劑盒應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。
產品名稱:蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原(Vtg)elisa試劑盒
英文名稱:Nasoniavitripennis vitellogenin,Vtg ELISA Kit
規(guī)格:48T/96T
保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液
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具有如下優(yōu)點:
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;
五、性價比非常好,節(jié)省實驗經費。
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
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注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
丁酸酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))DYRK1B Antibody2-基-4'-溴甲基聯(lián)
甲基酸酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Zap-70 (Tyr493)/Syk (Tyr526) AntibodyBOC-L-氟氨酸
甲酸酯(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Zap-70 (Tyr493)/Syk (Tyr526) Antibody2,6-二甲基-1,二氫-3,5-吡啶二羧酸二酯
酸酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Zap-70 (99F2) Rabbit mAbCBZ-L-纈氨酸
酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Zap-70 (136F12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)多紫杉
己酸酯(Standard for GC,>99%(GC))p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb硫代甲酰
棕櫚酸酯(standard for GC,≥99%(GC))p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb2-甲基--2-
異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))Zap-70 (L1E5) Mouse mAb甲基丁炔-3
(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAbN-Cbz-L-蛋氨酸
二二(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb(S)-(+)-間磺酸縮水甘油酯
二二甲(standard for GC,≥99.5%(GC),含0.01% BHT穩(wěn)定劑)Phospho-Syk (Tyr525/526) Antibody羥基酮
二酸酯(Standard for GC,>99%(GC))BATF (D7C5) Rabbit mAb (PE Conjuga)三異基亞酸酯
戊酸酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Syk Antibody2-溴-7-羥基萘
酸酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Syk Antibody二酸甲酯
2-甲基四(MeTHF)(Standard for GC,≥99.5%(GC))SimpleChIP® Human GLA Promor Primers2--氟甲
異戊烷(Standard for GC,≥99.7%(GC))Lck (V49) Antibody四二甲酸酐
酸甲酯(MA)(Standard for GC,>99%(GC))Phospho-Syk (Tyr323) Antibody槲皮素
丁酸甲酯(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Syk (Tyr323) Antibody(N-Boc-氨甲基)甲酸
蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原(Vtg)elisa試劑盒5H-5-甲基-6,7-二氫環(huán)戊基吡 98%磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體乙酸正酯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)鯉皰疹病通用探針法熒光定量PCR試劑盒反,反-2,4-壬二 >85.0%(GC)類固脫氫酶樣蛋白NSDHL抗體乙酸正酯 AR,99.0% 麥芽香肉桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒1-辛-3- 98%磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體氫氧化鋁 AR毛樣枝孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒2-戊基 ≥98%, FG磷酸化1型神經纖維瘤抗體氫氧化鋁 99.6%,1μm粗球孢子菌探針法熒光定量PCR試劑盒基(2-甲基-3-基)二硫 97%磷酸化谷氨酸受體2B抗體氫氧化鋁 99.8%,10μm,,高白度沙眼衣原體探針法熒光定量PCR試劑盒2-基硫 96%磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體氫氧化鋁 99.8%,25μm艱難梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒乙酸硫噻唑 99%磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體鄰二甲酸丁芐酯 分析標準品牛腎盂腎炎棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒2-(*基硅)基三氟磺酸鹽 97%磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體鄰二甲酸丁芐酯標準溶液 1000μg/ml,溶劑:甲指環(huán)蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
操作流程如下:
(1)僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。