細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞試劑盒說明書 | 6次/盒 | YS-X6832 |
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培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
細胞MAPK蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次
糖果環(huán)氨酸（cyclamate）含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
血乙醇脫氫酶IV活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
載玻片細胞PASE-7蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
Cy5標記二抗（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：100微升
血清葡糖酸苷酶（GLUCURONIDASE）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
冰凍切片組織PASE-6蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
蔬菜乙酸比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
組織單胺氧化酶A型（MAO－A）活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
石蠟切片組織PASE-5蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
細菌硫酸酶（rhodanase）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
體單胺氧化酶（MAO）總活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
PrimaCell™大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞試劑盒說明書硫酸汞鉀分子式：413.94英文名稱：Potassium mercury號：14099-12-8分子量： C3HgKN3S3
氫氧鍶分子式：265.76英文名稱：Strontium hydroxide號：1311-10-0分子量： Sr(OH)2·8H2O
鉻花R英文名稱：Chromium cyanide R分子式：536.39分子量：C23H15Na3O9S號：3564-18-9
5'-溴間三聯(lián)分子式：309.21英文名稱：5'- three.號：103068-20-8分子量： C18H13Br
8-甲喹啉分子式：143.19英文名稱：8- methyl group號：611-32-5分子量： C10H9N
2--5-溴嘧分子式：174英文名稱：2- amino -5-號：7752-82-1分子量： C4H4BrN3
二氯熒光黃英文名稱：Two chlorine fluorescence yellow分子式：401.2分子量： C20H10Cl2O5號：76-54-0
苦木提取物英文名稱：Quassia extract分子式：分子量：號：
1-金剛烷乙英文名稱：1- diamond分子式：194.27分子量： C12H18O2號：4942-47-6
黃叱精Y英文名稱：Huang Chijing Y分子式：248.71分子量： C12H13ClN4號：532-82-1
2,6-二羥-3,4-二甲吡分子式：139.15英文名稱：2,6- two hydroxy -3,4- two methyl pyridine號：84540-47-6分子量： C7H9NO2
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低 1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
