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產(chǎn)品名稱 | 乳腺癌細胞：HCC1937 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0092 |
商品介紹：
名稱 乳腺癌細胞：HCC1937 別稱HCC-1937 種屬人類 年齡（性別）女性，23歲 組織來源乳房；原發(fā)性導管癌；3級，ⅡB期 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述HCC1937細胞1995年10月13日最初來源于原發(fā)性導管癌，用了11.5個月建株。腫瘤分類為TNMⅡB期，3級。BRCA1分析表明，HCC1937細胞是BRCA 15382C突變純合的，而來源于同一病人的類淋巴母細胞細胞株在這個突變位點上是雜合的。另兩個家庭成員也有這個突變；一個同卵雙生姐妹也患有乳腺癌。HCC1937細胞有一個后天的Tp53突變，而其野生型等位基因丟失；一個PTEN基因的后天的純合缺失，以及多個與乳腺癌發(fā)病機理相關的位點上發(fā)生的雜合突變。HCC1937細胞Her2-neu和p53表達都呈陰性。HCC1937細胞的上皮細胞特異性標志上皮細胞糖蛋2(EGP2)和細胞角蛋白19都呈陽性；雌激素受體(ER)和孕酮(PR)表達陰性。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~50-60小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 受體表達情況estrogen receptor, negative; progesterone receptor, negative 基因表達情況Epithelial glycoprotein 2 (EGP2); cytokeratin 19 |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
狗 CXCL16 基因全長ORF克隆
狗 FGF18 基因全長ORF克隆
狗 CCL25 基因全長ORF克隆
狗 CXCL13 基因全長ORF克隆
狗 CCL26 基因全長ORF克隆
狗 CXCL12 基因全長ORF克隆
狗 GDF9 基因全長ORF克隆
狗 PDGFB 基因全長ORF克隆
狗 PDGFA 基因全長ORF克隆
狗 BMPR1A 基因全長ORF克隆
乳腺癌細胞：HCC1937 2 ug pDsRed2-Mito pDsRed2-Mito 低溫運輸，-20℃保存
無菌采樣袋（45cm*55cm） Sterile Homogeneous Bag 50個/包
5mL 成纖維細胞生長因子-不含動物成分 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
Rabbit Anti-chicken IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
MITF MITF相關轉錄因子抗體 規(guī)格: 0.2ml
RAMP/CDT2 維甲酸調節(jié)核基質相關蛋白 規(guī)格: 0.2mlBS69/Adenovirus 5 E1A binding protein 毒5結合蛋白BS69抗體(骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體相關分子1) 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-BRCA1(Ser1189) 磷酸化易基因1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CACNA1A/Cav2.1 電壓依賴性鈣通道Cav2.1抗體 規(guī)格: 0.2ml
MAGEE1/MAGEC2 黑色素瘤相關抗原C2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-M-CSF Receptor(Tyr809) 磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-B-Raf (Ser602) 磷酸化B-Raf抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-mouse IgG-Fc/FITC FITC標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Met(Tyr1234/1235) 磷酸化肝細胞生因子受體(原基因)抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激激4抗體 規(guī)格: 0.1ml
