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名稱 | MEG-01 (人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞)(STR鑒定正確) |
別稱 | Meg-01; MEG01; Meg01 |
種屬 | 人類 |
年齡（性別） | 男性，55歲 |
組織來源 | 未知 |
生長(zhǎng)特性 | 半貼半懸 |
細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 |
背景描述 | MEG-01細(xì)胞源自一位CML患者成巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)換期的骨髓細(xì)胞。細(xì)胞質(zhì)因子Ⅷ和表面球蛋白Ⅱb/Ⅲa、高碘酸-Schiff(PAS)反應(yīng)；α醋酸萘酯酶和酸性磷酸酶陽性；髓過氧化物酶、α-丁酸萘酯酶、氯化醋酸AS-D萘酚酯酶和堿性磷酸酶陰性。用單克隆抗體BA-1(抗B細(xì)胞、粒性白細(xì)胞)，HPL-3(抗球蛋白Ⅱb/Ⅲa)和20.3(抗單核細(xì)胞、血小板)染色成陽性，其他淋巴和骨髓類抗體成陰性。 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:3 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細(xì)胞傳代：
1. MEG-01人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
UL16結(jié)合蛋白2封閉多肽 | 腸道致細(xì)胞病變?nèi)斯聝翰《?/span>PCR檢測(cè)試劑盒 |
粘質(zhì)沙雷菌PCR試劑盒 | 二氫葉suan還原meiELISA試劑盒 |
人白介su1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)試劑盒 ELISA | 多胺調(diào)節(jié)因子1結(jié)合蛋白1ELISA試劑盒 |
人β-黑色su細(xì)胞刺激su(β-MSH)檢測(cè)試劑盒elisa | 防御suβ127ELISA試劑盒 |
人抗風(fēng)疹病毒IgM抗體(anti-RVIgM)ELISA試劑盒 | 端粒mei逆轉(zhuǎn)錄meiELISA試劑盒 |
人補(bǔ)體片段3d(C3d)試劑盒ELISA | S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白BELISA試劑盒 |
原癌基因蛋白c-kit封閉多肽 | 甲型流感病毒H3亞型(IAV-H3)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
G蛋白偶聯(lián)受體激mei相互作用蛋白1封閉多肽 | 牛皰疹病毒1型PCR檢測(cè)試劑盒 |
Cy7標(biāo)記的鏈霉親和su | 豬圓環(huán)病毒型/豬圓環(huán)病毒型/偽狂犬病毒(PCV-/PCV-/PRV)核suan檢測(cè)試劑盒 |
智力發(fā)育調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白BRWD3封閉多肽 | 破傷風(fēng)桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
DCN1樣蛋白3封閉多肽 | 摩氏摩根菌PCR試劑盒 |
骨橋蛋白/分泌型磷蛋白1封閉多肽 | MEG-01人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞牛腺病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 |
液泡蛋白分選蛋白33B封閉多肽 | 牛皰疹病毒通用PCR試劑盒 |
過量位點(diǎn)蛋白1封閉多肽 | 棉花源性成分PCR試劑盒 |
LETM1蛋白封閉多肽 | 摩氏摩根菌PCR試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
