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名稱 | SW-13 (人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞) (STR鑒定正確) |
種屬 | 人類 |
年齡（性別） | 女性，55歲 |
組織來源 | 器官：腎上腺；組織：皮質(zhì)；腫瘤階段：Ⅳ級；疾?。涸l(fā)性小細胞癌 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
背景描述 | SW-13細胞是于1971年8月從55歲的患有腎上腺皮質(zhì)癌的白人女性患者中分離建立的。該患者的病理診斷為Ⅳ級腎上腺皮質(zhì)原發(fā)性小細胞癌。電鏡顯示，SW-13細胞有許多球形縫隙連接(BGJ)。 |
生長培養(yǎng)基 | Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，100% 溫度：37℃ |
細胞傳代：
1. SW-13人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
白細胞介su1受體銜接蛋白封閉多肽 | 尼氏單孢子蟲PCR檢測試劑盒 |
禽副粘病毒通用RT-PCR試劑盒（暫停） | 分泌粒蛋白ⅤELISA試劑盒 |
人補體3裂解產(chǎn)物(C3SP) ELISA Kit | 防御suβ121ELISA試劑盒 |
人Fc受體樣蛋白3(FCRL3)ELISA檢測試劑盒 | 動力蛋白軸絲重鏈11ELISA試劑盒 |
人因子Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)elisa試劑盒 | 芳犬尿氨suan甲酰胺meiELISA試劑盒 |
人α(AMY1)試劑盒ELISA | Apelin |
鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激mei4封閉多肽 | 空腸彎曲桿菌PCR試劑盒 |
磷suan化微管相關(guān)蛋白封閉多肽 | 腦膜蠕蟲PCR檢測試劑盒 |
DNA復(fù)制解旋mei2樣封閉多肽 | 伽氏疏螺旋體PCR試劑盒 |
整合suβ1/Integrin β1封閉多肽 | 羊特定基因序列PCR檢測試劑盒 |
DNA修復(fù)蛋白Rad50封閉多肽 | 牛痘病毒PCR檢測試劑盒 |
ADP核糖基化因子6封閉多肽 | SW-13人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒 |
紅細胞膜帶4.9蛋白封閉多肽 | 南非諾卡菌PCR試劑盒 |
磷suan化鈣調(diào)磷suanmeiA/鈣依賴磷suanmeiA封閉多肽 | 牛腸杯狀病毒RT-PCR試劑盒 |
細胞質(zhì)分裂付出蛋白1封閉多肽 | 牛分支桿菌卡介苗PCR檢測試劑盒 |
細胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細胞使用。
