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名稱(chēng) | bEnd.3 [BEND3] (小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞) (種屬鑒定正確) |
別稱(chēng) | bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; brain-derived Endothelial cells.3 |
種屬 | 小鼠 |
年齡（性別） | 6周齡 |
組織來(lái)源 | 大腦皮層 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
背景描述 | The cells were transformed by infection with the NTKmT retrovirus vector that expresses polyomavirus middle T antigen |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:4-1:6 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~24-32小時(shí) |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
抗原表達(dá)情況 | ICAM-1 +; VCAM-1 +; MAdCAM-1 + |
基因表達(dá)情況 | von Willebrand factor,ICAM-1 +; VCAM-1 +; MAdCAM-1 +,The endothelial nature of these cells was confirmed by the observed expression of von Willebrand factor and uptake of fluorescently labeled low density lipoprotein (LDL).,The expression of Peyer's Patch high endothelial receptor for lymphocytes, the mucosal vascular addressin (MAdCAM-1) and E-selectin can be induced on bEnd |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2299 BCRC; 60515 ECACC; 96091929 |
細(xì)胞傳代：
1. bEnd.3小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開(kāi)。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
氧化固醇結(jié)合蛋白4封閉多肽 | 人乳頭瘤病毒16PCR檢測(cè)試劑盒 |
遲鈍愛(ài)德華菌PCR試劑盒 | 鈣磷蛋白2ELISA試劑盒 |
人程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)試劑盒ELISA | 分離蛋白2ELISA試劑盒 |
人CC趨化因子受體7(CCR7)試劑盒ELISA | 內(nèi)切核suanmeiVELISA試劑盒 |
人內(nèi)脂su/內(nèi)臟脂肪su(visfatin)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 分揀連接蛋白13ELISA試劑盒 |
人PC4,SFRS1互動(dòng)蛋白1(PSIP1)ELISA試劑盒 | 白細(xì)胞介su11ELISA試劑盒 |
呼吸道合胞病毒封閉多肽 | 鰓霉屬通用PCR試劑盒 |
絲氨suan蛋白mei38封閉多肽 | 綿羊肺腺瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄樣蛋白4封閉多肽 | 伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌PCR試劑盒 |
著絲粒蛋白X封閉多肽 | 豬牛絳蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 |
DPM3蛋白封閉多肽 | 牛腺病毒3型(BAV-3)核suan檢測(cè)試劑盒 |
線(xiàn)粒體抗病毒信號(hào)MAVS蛋白封閉多肽 | bEnd.3小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株莫拉氏菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
FAM47E蛋白封閉多肽 | 綿羊皰疹病毒1型PCR試劑盒 |
致死因子惡性腦瘤樣蛋白4封閉多肽 | 牛腺病毒（4-8型）通用PCR 試劑盒 |
基質(zhì)金屬蛋白mei2封閉多肽 | 牛乳頭瘤病毒PCR試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無(wú)菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開(kāi)始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過(guò)的器械要冷卻后才能使用；已吸過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過(guò)火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過(guò)早開(kāi)瓶，開(kāi)瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過(guò)早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話(huà)，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專(zhuān)管專(zhuān)用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
