細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠小腸平滑肌細(xì)胞試劑盒 | 6次/盒 | YS-X6779 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
口腔粘膜細(xì)胞基因組DNA純化試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
植物胱氨酸(cystine)含量比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
植物彌散吲哚-3-乙酸(IAA)熒光定量檢測試劑盒(包括萃取) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型野油菜黃單胞秋海棠致病變種(Xanthomonas campestris pv.begoniae; Xcb)基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
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動物硬組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10次
細(xì)胞谷氨酸酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性光譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
植物細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
細(xì)胞脂肪酸費斯克勒(Fischler)染色試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
冰凍切片組織APC蛋白表達(dá)CDK2顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
細(xì)胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1/2)總活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
冰凍切片組織NF KAPPA B P65蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20次
PrimaCell™大鼠小腸平滑肌細(xì)胞試劑盒5-氯-2,3-二溴-1-氟分子式:288.34英文名稱:5- -2,3- -1- - dibromo chloride號:208186-78-1分子量: C6H2Br2ClF
5,8-二溴-2,3-二喹喔啉分子式:440.14英文名稱:5,8- dibromo -2,3- two phenyl quinoxaline號:94544-77-1分子量: C20H12Br2N2
2--4,6-二甲嘧分子式:123.16英文名稱:2- two -4,6-號:767-15-7分子量: C6H9N3
酸可樂分子式:英文名稱:Hydrochloric acid號:分子量:
間甲甲酰分子式:154.59英文名稱:Methyl benzoyl chloride號:1711-06-4分子量: CH3C6H4COCl
苦參堿英文名稱:Matrine分子式:248.36分子量:C15H24N2O號:519-02-8
乙油英文名稱:Ethyl iodide分子式:分子量:號:8008-53-5
生粉英文名稱:Rooting powder分子式:分子量:號:9873982
依普黃酮英文名稱:Ipriflavone分子式:280.32分子量: C18H16O3號:35212-22-7
4-四氫吡分子式:318.54英文名稱:4- - four hydrogen pyran號:1836-77-7分子量: C12H6Cl3NO3
3,5-二甲并(B)硫代分子式:162.25英文名稱:3,5- two methyl benzene (B)號:1964-45-0分子量: C10H10S
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。