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名稱 | P19 [P-19] (小鼠畸胎瘤細(xì)胞) (種屬鑒定正確) |
別稱 | P-19 |
種屬 | 小鼠 |
年齡（性別） | 雄性 |
組織來(lái)源 | 胚胎；畸胎癌 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
背景描述 | P19細(xì)胞是從C3H/He小鼠中誘導(dǎo)的畸胎癌中建立的；P19細(xì)胞在含有0.1mMβ-巰基乙醇的培養(yǎng)基中克隆的效率高。細(xì)胞具有多能性：在500nM維生素-A酸誘導(dǎo)下，細(xì)胞可以分化成神經(jīng)樣和神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞；在0.5%-1.0%二甲亞砜(DMSO)存在下，細(xì)胞分化形成心臟和骨骼肌樣基質(zhì)，但不形成神經(jīng)樣或神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞。在DMSO和維生素-A酸同時(shí)存在時(shí)，細(xì)胞的分化與只有維生素-A酸一樣。 |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | MEMα＋7.5% CS＋2.5% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~48-72小時(shí) |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-1825 DSMZ; ACC-316 ECACC; 95102107 |
細(xì)胞傳代：
1. P19小鼠畸胎瘤細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
9號(hào)染色體開放閱讀框156封閉多肽 | 鳩寧病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 |
附紅細(xì)胞體（嗜血支原體）屬通用PCR試劑盒 | 甘油激meiELISA試劑盒 |
人單純皰疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗體(IgM)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 鈣蛋白mei9ELISA試劑盒 |
人3-葡萄糖苷suan孕二醇(PdG)試劑盒ELISA | ER脂質(zhì)Raft關(guān)聯(lián)蛋白1ELISA試劑盒 |
人抗菌肽(Att)檢測(cè)試劑盒elisa | 副腫瘤抗原MA2ELISA試劑盒 |
人EB病毒(EBv)抗體(IgG)ELISA試劑盒 | 蛛毒su受體1ELISA試劑盒 |
非受體酪氨suan蛋白激mei2封閉多肽 | 新生隱球菌PCR試劑盒 |
G蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白1封閉多肽 | 貓免疫缺陷病毒PCR試劑盒 |
DYDC1蛋白封閉多肽 | 雙?？刹《?/span>PCR檢測(cè)試劑盒 |
粘結(jié)蛋白SA2封閉多肽 | 丹毒桿菌(SER)核suan檢測(cè)試劑盒 |
E3泛su蛋白連接mei144B/環(huán)指蛋白144B封閉多肽 | 平尾毛細(xì)線蟲PCR試劑盒 |
組蛋白H2B封閉多肽 | P19小鼠畸胎瘤細(xì)胞毛樣枝孢霉PCR檢測(cè)試劑盒 |
24α7羥化mei封閉多肽 | 貓血支原體PCR試劑盒 |
細(xì)胞連接相關(guān)蛋白1封閉多肽 | 皮炎芽生菌PCR試劑盒 |
220kDa蛋白激meiD相互作用蛋白封閉多肽 | 皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無(wú)菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過(guò)的器械要冷卻后才能使用；已吸過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過(guò)火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過(guò)早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過(guò)早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
