細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | 小鼠淋巴瘤細胞：EL4 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0078 |
商品介紹：
名稱 小鼠淋巴瘤細胞：EL4 別稱EL-4; EL 4; E.L.4 種屬小鼠 年齡（性別）不詳 組織來源T淋巴細胞；淋巴瘤 生長特性懸浮細胞 細胞形態(tài)淋巴母細胞樣 背景描述EL4細胞是從用9,10-二甲基-1,2-苯并蒽在C57BL小鼠中誘導的淋巴瘤中建立的。EL4細胞能抗0.1mM，對20mcg/ml PHA敏感。EL4細胞還有一個亞株(EL4.IL-2)可以生成高水平的IL-2。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% HS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 抗原表達情況H-2b; Thy-1.2 注意事項該細胞為懸浮細胞，請注意離心收集細胞懸液；請勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液。 |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 TAGLN 基因全長ORF克隆
大鼠 CTSB 基因全長ORF克隆
大鼠 KLK13 基因全長ORF克隆
大鼠 TCP1 基因全長ORF克隆
大鼠 LOC683897 基因全長ORF克隆
大鼠 UGP2 基因全長ORF克隆
大鼠 MTCH2 基因全長ORF克隆
大鼠 MTHFD2 基因全長ORF克隆
大鼠 IMPDH2 基因全長ORF克隆
大鼠 MRPS22 / LOC683519 基因全長ORF克隆
小鼠淋巴瘤細胞：EL4 Plzf 早幼粒細胞白鋅指蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Bovine IgM/HRP 辣根過氧化物標記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml
ACTH (1-39) 促上皮質(zhì)激素(1-39)抗體 0.1mlAngiomotin 管抑素結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
EPDR1 哺動物室管膜相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
5次 大提無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout Maxi Column Endo-free Plasmid DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)
1瓶 MS1細胞株 MS1 低溫運輸和保存
50T 人GAPDH基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
S100A14 S100A14/15抗體 規(guī)格: 0.1ml
RFPL4B/RNF211 環(huán)指蛋白211抗體 規(guī)格: 0.2mlANKRD13B 錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體 規(guī)格: 0.2ml
5g 亮綠 SF( 淡黃 ) Light Green SF Yellowish 室溫干燥保存
ANGL2/ANGPTL2 管生成素樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
含225ml胰酪胨大肉湯均質(zhì)袋 Trypticase Soy Polymyxin Broth 10個/包
2 ug pNTAP- C pNTAP- C 低溫運輸，-20℃保存
