細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 原位胰腺腺癌細(xì)胞：BxPC-3 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細(xì)胞系 |
貨號 | GOY-01X0042 |
商品介紹：
名稱 原位胰腺腺癌細(xì)胞：BxPC-3 別稱BxPc-3; BXPC-3; Bx-PC3; BXPC3; BxPC3; BxPc3; Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3 種屬人類 年齡（性別）女性，61歲 組織來源胰腺；腺癌 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述BxPC-3細(xì)胞不表達(dá)囊腫性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)子(CFTR)，CFTR陽性的細(xì)胞株是Capan-1。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~48-60小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells. 基因表達(dá)情況mucin; pancreas cancer specific antigen (pancreas cancer associated antigen); carcinoembryonic antigen (CEA) |
使用方法：
收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 GPX3 基因全長ORF克隆
大鼠 CYP4A3 基因全長ORF克隆
大鼠 SLC25A17 基因全長ORF克隆
大鼠 SERPINB3A 基因全長ORF克隆
大鼠 RASSF7 基因全長ORF克隆
大鼠 FAH 基因全長ORF克隆
大鼠 GLB1 基因全長ORF克隆
大鼠 NOB1 基因全長ORF克隆
大鼠 HMGCS2 基因全長ORF克隆
大鼠 FGA 基因全長ORF克隆
原位胰腺腺癌細(xì)胞：BxPC-3 250mL Casein Blocking Buffer in PBS with azide（酪蛋白封堵劑） Casein Blocking Buffer in PBS with azide 常溫保存
葡萄糖發(fā)酵管 20支
1瓶 A549細(xì)胞株 A549 低溫運(yùn)輸和保存
改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ) Skirrow Agar Base ,Modified 250g
10mL DNA探針變性液 DNA Probe Denaturation Solution 常溫
2 ug pcDNA3 Flag pcDNA3 Flag 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
0.1mL×10 Origami B(DE3) plysS感受態(tài)細(xì)胞 Origami B (DE3) plysS Competent Cell -80℃保存
10次 百萬堿基級植物DNAout 常溫
Rabbit Anti-mouse IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlSMAD5 細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD5抗體 規(guī)格: 0.1ml
9號培養(yǎng)基 250g
Rabbit Anti-mouse IgG/Bio 標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
ATP4B 鉀ATP通道蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
