測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6759 |
商品介紹
測(cè)定意義 β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶,產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。 測(cè)定原理 β-木糖苷酶催化對(duì)硝基-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基,對(duì)硝基在405nm處有特征吸收峰,測(cè)定405nm光吸收增加速率,可計(jì)算β-木糖苷酶活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、微量石英比色皿和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
N-芐氧羰基-D-蛋 98%惡草酮標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=2%,溶劑:酮Rabbit Anti-rat IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗大鼠IgM
H-Met-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh烯肟菌酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,90%Rabbit Anti-Guinea IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗豚鼠IgG
S-甲基-L-半胱 98%氧標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6~5%,酮(劇品)Rabbit Anti-Guinea IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗豚鼠IgM
S-(4-甲氧基芐基)-L-半胱 98%氧標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=6~5%,酮(劇品)Rabbit Anti-MUME IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG
蛋氨酰 98%烯苯噻唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%Mouse Anti-goat IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)小鼠抗羊IgG
L-蛋叔丁酯鹽酸鹽 98%乙氧氟草 分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%Mouse Anti-goat IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)小鼠抗羊IgM
D-蛋甲酯鹽酸鹽 99%炔惡草酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%Mouse Anti-human IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)小鼠抗人IgG
4-甲氧基-L-苯 98% 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%Mouse Anti-rabbit IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)小鼠抗兔IgG
β木糖苷酶微量法檢測(cè)試劑盒補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
難辨梭狀芽孢桿菌毒素A(TOXA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生長(zhǎng)刺激因子(GROα/CXCL1/MGSA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠糖原合成激(GSK)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)免疫試劑盒*直銷
線粒體肽蛋亞砜還原(MSRA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
水痘帶狀皰疹病毒IgM(VZV-IgM)免疫試劑盒*直銷
并殖吸蟲(chóng)抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β誘導(dǎo)蛋白IG-H3(TGFBI/BIGH3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
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