微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類(lèi)培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱(chēng)為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱(chēng)為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱(chēng)為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱(chēng)為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱(chēng)為四級(jí)發(fā)酵。
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 用途 | 貨號(hào) |
德氏乳桿菌乳酸亞種(萊氏曼氏乳桿菌) | 僅供科研 | GOY-01J6563
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菌種的培養(yǎng):
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱(chēng)種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過(guò)程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無(wú)菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類(lèi)孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類(lèi)的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無(wú)機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無(wú)雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。
對(duì) AR,99.5 %N,N-二甲基十二烷-N-氧化物 95%Human Neuroglobin,NGB ELISA Kit 人腦紅蛋白
4-(三氟甲氧基) 99%β-甘油鈉 98%,五水Human rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit 人的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)
焦鈣 AR二苯乙炔 99%Human amyloid beta peptide 1-40,A Beta1-40 ELISA Kit 人β淀粉樣蛋白1-40
四氧化三錳 SPN,N'-二苯基脲 98%Human myelin basic protein,MBP ELISA Kit 人髓磷脂堿性蛋白
聚乙二單甲 均分子量350 N,N'-二苯基脲 95%Human High mobility group protein B1,HMGB-1 ELISA Kit 人高遷移率族蛋白B1
聚 平均分子量 2.0003,4-二氫-2H- 98%Human desmin,Des ELISA Kit 人結(jié)蛋白
聚 平均分子量 4002,2'-二羥基聯(lián)苯 99%Human Soluble protein-100,S-100 ELISA Kit 人S100蛋白
二芐 98%二巰基 97%Human Soluble protein-100B,S-100B ELISA Kit 人S100B蛋白
德氏乳桿菌乳酸亞種(萊氏曼氏乳桿菌)間硝標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:Anti-phospho-ATP citrate lyase(Ser455) 化三腺檸檬裂解抗體人線粒體乙脫氫(ALDM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
間硝 GR,99.0%Anti-phospho-Ataxin-1(Ser775) 化失調(diào)癥蛋白1抗體人果糖二縮A(ALDOA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
對(duì) AR,99.0%Anti-AVEN 凋亡、半胱蛋白激活抑制劑抗體人堿性鞘脂二酯(Alk-Smase)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
對(duì) 99.7%Anti-Kir6.2 ATP敏感性通道亞kir6.2抗體人谷轉(zhuǎn)氨(ALT)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
間 GR,99%Anti-AVPR2 精氨受體2抗體人抑制素B(INHB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
間 CPAnti-Bdkrb2/B2R 緩激肽B2受體抗體人周期素依賴(lài)性激6(CDK6)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
間 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.7%Anti-Axin1 軸蛋白1抗體人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP/α1M)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
97%Anei-ATX 自分泌運(yùn)動(dòng)因子抗體人周期素依賴(lài)性激8(CDK8)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
1,1-二硫硝乙烯 98%Anti-Aurora A 有絲分裂激A抗體人抗繆勒管激素(AMH)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-溴-3-吡 97%Anti-Aurora B 有絲分裂激B抗體人化腺苷活化蛋白激(AMPK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
5-溴-2-氟吡 98%Anti-Aurora C 有絲分裂激B抗體人唾液淀粉α1(AMY1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(R)-(+)-N-叔丁氧羰-3-氨吡咯烷 97%Anti-Aurora A/B/C 有絲分裂激A/B/C抗體人胰淀素(IAPP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(s)-(-)-N-叔丁氧羰-3-氨吡咯烷 98%Anti-B7-H1/CD274 程序性死亡配體1抗體人周期素依賴(lài)性激抑制因子3(CDKN3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
代二膦 97%Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體人血管抑素(ANG)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
5--2-氟吡 99%Anti-ICOS-L/B7-H2/CD275 誘導(dǎo)協(xié)同激分子配體CD275抗體人血管緊張素II (Ang-II)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒