操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
規(guī)格 | 50管/50樣 |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6596 |
商品介紹:
測(cè)定意義
順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環(huán)中的酶,催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過(guò)脫水與加水反應(yīng),使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備。
測(cè)定原理
ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH,導(dǎo)致340nm處光吸收上升。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
氫氧化鈷 98%2,6-二氯芐基氯 分析標(biāo)準(zhǔn)品SP-R(Human substance P receptor) ELISA Kit 人P物質(zhì)受體
硝酸鈷,六水 AR,99%4-氟氯芐 98%cGMP(Human Cyclic guanosine monophosphate) ELISA Kit 人環(huán)鳥(niǎo)苷
硝酸鈷,六水 99.99% metals basis4-甲氧基苯甲酰氯 97%Lp-PL-A2(Human lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit 人脂蛋白磷脂A2
鈷,七水 CP,98.5%環(huán)戊 Standard for GC,>99.5%(GC)EL(Human Endothelial lipase) ELISA Kit 人內(nèi)皮脂肪
氯化鈷 CP環(huán)戊 99%sm Actinin- Alpha(Human skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit 人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α
三氧化鉬 99.95%2--5-氟吡 97%BMP-7(Human Bone morphogenetic protein 7) ELISA Kit 人骨成型蛋白7
三氧化鉬 99.9% metals basis一氯酮 96%(劇品)25(OH)D3/25 HVD3(Human 25-Dihydroxy vitamin D3)ELISA Kit 人25羥基3
三氧化鉬 AR,99.5%(RS)-1H--2-羧酸 97%LTB4(Human Leukotriene B4) ELISA Kit 人白三烯B4
順烏頭酸酶(ACO)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒 氧化鋁 99.998% metals basis ,5~6μm,粉末角蛋白7
氧化鋁 99.99%,鍍膜異硫熒光素(FITC)標(biāo)記糖尿病相關(guān)肽1-37
氧化鋁G TLC凋亡蛋白活性因子-1(抗原)
三氧化二銻 SP凋亡蛋白活性因子-1(抗原)
三氧化二銻 99.99% metals basis雄激素受體(多肽抗原)
三氧化二銻 AR,99.5%5-羥色受體2A抗原
三氧化二銻 99.9%,平均粒徑:0.7 µmⅡ(II)抗原
三氧化二銻 99.999% metals basis5-羥色受體3抗原
三氧化二銻 CP,99%5-羥色受體4抗原
活性氧化鋁 40-60目 GC粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗原
活性氧化鋁 60-80目 GC整合素樣金屬蛋白與1型-7抗原
活性氧化鋁 80-100目 GC血管緊張素原(抗原)
氟化鋁 99.9% metals basis5-脂氧合抗原
氟化鋁 99.99% metals basis辣根過(guò)氧化物標(biāo)記整合素樣金屬蛋白與1型-7抗原
鋁片 0.1mm,99.99% metals basis載脂蛋白E(抗原)