實(shí)驗(yàn)操作步驟：
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。
b．立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
公司向您推薦Primarker™大鼠食管平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒的詳細(xì)說明：
產(chǎn)品名稱 | Primarker™大鼠食管平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒 |
規(guī)格 | 6次/盒 |
貨號(hào) | YS-X7033 |
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
特定微型RNA目標(biāo)基因探測(cè)技術(shù)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：5次
乙酰膽堿酯酶活性抑制劑篩選比色法檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
SYBR綠色熒光核酸染色試劑盒（配制25毫升/次） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
通用型柑桔枯萎病茍養(yǎng)木桿菌（Xylella fastidiosa；Xf）基因檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
組織FES激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
細(xì)胞組蛋白H3-K9甲基化流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
通用型野油菜黃單胞菌（Xanthomonas campestris；Xc）基因檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
細(xì)胞EPHA3激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
寡核苷酸探針非同位素AP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交*試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：5次
通用型絲核菌種（Rhizoctonia species）基因檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
組織C-MET激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
真菌/酵母細(xì)胞脈沖凝膠電泳DNA樣品制備試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
Primarker™大鼠食管平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒抗生Ⅶ號(hào)培養(yǎng)基/抗生素7號(hào)培養(yǎng)基/Antibiotic Agar NO.7孢噻圬鈉等藥品的效價(jià)測(cè)定250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
大鼠氣管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基草菇 Volvariella bombycina
枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis嗜線蟲致病桿菌 Xenorhabdus nematophila
RSC96(大鼠雪旺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠腸微血管細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
少霉 Rhizopus arrhizus紅曲霉 Monascus anka
MuM-2B(人眼脈絡(luò)色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
戊糖片球菌 Pediococcus pentosaceus蘇云金芽胞桿菌柏氏變種 Bacillus thuringiensis var. berliner
70kDa熱休克蛋白1樣蛋白(HSPA1L)重組蛋白英文名稱：Recombinant Heat Shock 70kDa Protein 1 Like Protein (HSPA1L)
MuM-2C(人眼脈絡(luò)色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
體改良馬丁培養(yǎng)基/Martin Broth,Modified(Liquid)菌苗、生物制品和血制品真菌無菌檢驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
