測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
50管/48樣 | 可見分光光度法 | GOY-01S6499 |
商品介紹
測(cè)定意義 氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素,自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用??諝庵械牡?dú)獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮,經(jīng)過硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮,后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物,植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。 測(cè)定原理 銨態(tài)氮在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和作用,生成水溶性染料靛酚藍(lán),在625nm處有特征吸收峰,吸光值與銨態(tài)氮含量成正比。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、常溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。
Saccharomyces cerevisiae生長(zhǎng)停滯基因6檢測(cè)試劑盒
Saccharomyces cerevisiae生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43檢測(cè)試劑盒
Saccharomyces cerevisiae檢測(cè)試劑盒
Saccharomyces cerevisiae生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2檢測(cè)試劑盒
Saccharomyces cerevisiae食道癌相關(guān)基因4蛋白檢測(cè)試劑盒
Saccharomyces cerevisiae視黃結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
Saccharomyces cerevisiae視黃結(jié)合蛋白4檢測(cè)試劑盒
Candida sp.嗜鉻粒蛋白A檢測(cè)試劑盒
植物銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒聚乙二壬 90% active ingredients basisAnti-CCL24/Eotaxin-2/FITC 熒光素標(biāo)記嗜粒趨化蛋白24抗體IgG大鼠叢生蛋白(CLU)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
聚乙二壬 90% active ingredients basisAnti-CCL27/CTACK/FITC 熒光素標(biāo)記皮膚T虜獲趨化因子抗體IgG大鼠Ⅱ(FⅡ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
對(duì)羥 AR,99.0%Anti-CCL26/FITC 熒光素標(biāo)記抗嗜粒趨化蛋白3抗體IgG大鼠Ⅲ(FⅢ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二乙二二丁 99%Anti-CCL28/FITC 熒光素標(biāo)記粘膜相關(guān)上皮趨化因子MEC抗體IgG大鼠Ⅹ(FⅩ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
烯糠酯 95%Anti-CCP/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗瓜氨環(huán)肽抗體IgG大鼠ⅩⅢ(FⅩⅢ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
縮水甘油糠 96%Anti-CCR-1/FITC 熒光素標(biāo)記趨化因子受體1抗體IgG大鼠Ⅻ(FⅫ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
烯異酯 85-90%,含150-200 ppm MEHQ穩(wěn)定劑Anti-CCR-2/5/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體2/5抗體IgG大鼠Ⅸ(FIX)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二烯新戊二酯 90%Anti-CCR-2A/FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體2A抗體IgG大鼠V(FV)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三羥烷烯酯 80%Anti-CCR-2B/FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體2B抗體IgG大鼠絲切蛋白1(CFL1) 聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
環(huán)烷羧 98%Anti-CCR-3/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體3抗體IgG大鼠絲切蛋白2(CFL2) 聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2,4-二羥 98%Anti-CCR-4/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體4抗體IgG大鼠Ⅰ型膠原(COL1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2,4-二羥 ≥97%,KosherAnti-CCR-5/FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體5抗體IgG大鼠Ⅱ型膠原(COL2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
N-異 99%Anti-CCR6/CD196/FITC 熒光素標(biāo)記趨化因子受體6抗體IgG大鼠Ⅲ型膠原(COL3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
N-異 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-CCR-7/FITC 熒光素標(biāo)記CC趨化因子受體7抗體IgG大鼠Ⅳ型膠原(COL4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
間二 98%Anti-CCR-8 /FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體8抗體IgG大鼠Ⅰ型膠原α2(COL1α2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒