實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
公司采用的全是進口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強,無效包退包換,公司提供免費代測服務(wù),各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全,質(zhì)量可靠。
產(chǎn)品名稱 | NF-κBp65 elisa試劑盒價格 |
英文名稱 | NF-κBp65 elisa Kit |
貨號 | GOY-H7474 |
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樣品收集、處理及保存:
1).細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2)細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3)血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4)血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5)體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6.)組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。?
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37℃暗處反應15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450 nm處測吸光值。
土地分枝桿菌RNF133 環(huán)指蛋白133抗體300 ul
胃分枝桿菌RNF138 環(huán)指蛋白138抗體100 ul
阿伯丁沙門菌RNF121 環(huán)指蛋白121抗體20 ul
百日咳博德特氏菌RNF113B 環(huán)指蛋白113B抗體100 ul
侵肺巴斯德氏菌RNF150 環(huán)指蛋白150抗體100 ul
豬肺炎支原體RNF165 環(huán)指蛋白165抗體100 ul
牛輪狀病毒RNF169 環(huán)指蛋白169抗體300 ul
早熟艾美爾球蟲RNF170 環(huán)指蛋白170抗體100 ul
禽腺病毒(2型)RNF185 環(huán)指蛋白185抗體20 ul
猿輪狀病毒RNF186 環(huán)指蛋白186抗體100 ul
禽腺病毒RNF215 環(huán)指蛋白215抗體1 Kit
減蛋綜合征病毒RNF32 環(huán)指蛋白32抗體100 ug
禽白血病病毒USP9X 泛素特異性蛋白酶9X抗體100 ul
支氣管敗血波氏菌USP10 去泛素酶10抗體100 ul
嗜肺巴氏桿菌Mycobacterium 結(jié)核分枝桿菌抗體100 ul
牛鏈球菌BECN1L1 Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域樣蛋白1抗體100 ul
傳染性牛鼻氣管炎病毒BEND5 BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體100 ul
溶血性曼氏桿菌phospho-IRF3(Ser386) 磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3抗體20 ul
NF-κBp65 elisa試劑盒價格GCK(Human glucokinase) 檢測試劑盒 葡萄糖激酶* 規(guī)格: 48T/96T
GCA(Human gastrin cell antibody) 檢測試劑盒 胃泌素細胞抗體* 規(guī)格: 48T/96T
GC 檢測試劑盒 內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素* 規(guī)格: 48T/96T
Gbp4(Human guanylate nucleotide binding protein 4) 檢測試劑盒 鳥苷酸結(jié)合蛋白4* 規(guī)格: 48T/96T
GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) 檢測試劑盒 抗腎小球基底膜抗體* 規(guī)格: 48T/96T
GATA4Mouse GATA binding protein 4) 檢測試劑盒 GATA結(jié)合蛋白4* 規(guī)格: 48T/96T
GATA4 檢測試劑盒 muman GATA結(jié)合蛋白4 ELISA試劑盒* 規(guī)格: 48T/96T
操作步驟:
1)運用前,將所有試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫,防止加樣時參加很多的氣泡,發(fā)生加樣上的差錯。
2)依據(jù)待測樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個規(guī)范品和空白孔主張做復孔。每個樣品依據(jù)自個的數(shù)量來定,能運用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。
3)參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內(nèi)。當即參加50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,悄悄振動混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
5)每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP,悄悄振動混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
7)每孔參加底物A、B各50ul,悄悄振動混勻,37℃溫育10分鐘。防止光照。
8)取出酶標板,敏捷參加50ul停止液,參加停止液后應當即測定成果。
9)在450nm波利益測定各孔的OD值。