細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠肝細胞：BRL 3A |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0036 |
商品介紹：
名稱 大鼠肝細胞：BRL 3A 別稱BRL3A; BRL 3A; Buffalo Rat Liver-3A 種屬大鼠 年齡（性別）不詳 組織來源肝 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 背景描述BRL 3A細胞的無血清條件培養(yǎng)基是MSA的一個來源，MSA多肽家族能夠部分滿足雞胚成纖維細胞對血清的需求。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基MEM（ATCC改良)＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達情況Somatomedin like multiplication stimulating activity (MSA) |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 RAC2 基因全長ORF克隆
大鼠 KRT14 基因全長ORF克隆
大鼠 SRI 基因全長ORF克隆
大鼠 SFR1 基因全長ORF克隆
大鼠 NAPA 基因全長ORF克隆
大鼠 GNPDA1 基因全長ORF克隆
大鼠 GTPBP5 基因全長ORF克隆
大鼠 PPT2 基因全長ORF克隆
大鼠 PLBD1 基因全長ORF克隆
大鼠 G6PC 基因全長ORF克隆
大鼠肝細胞：BRL 3A Phospho-AP2M1 (Thr156) 磷酸化接相關蛋白復合體AP-2μ鏈1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CD158e NK細胞抑制性受體3DL1抗體 規(guī)格: 0.2mlPCDHGC5 原鈣粘蛋白γC5抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-MEK6 (Ser202) 磷酸化絲裂原活化蛋白激MKK6抗體 規(guī)格: 0.1ml
CXCR7/RDC1 細胞表面趨化因子受體7抗體 規(guī)格: 0.1ml
KIN2 皮膚相互作用蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Mst2(Thr180) 磷酸化蛋白激MST2抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Bov IgG 兔抗牛IgG 規(guī)格: 1mg
Calpastatin 鈣蛋白抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-FRA1(Ser265) 磷酸化FRA-1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG/AP 堿性磷酸（AP）標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Annexin I 膜粘連蛋白 I抗體 規(guī)格: 0.1ml
Legumain 蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
2 ug pBpSTR1 pBpSTR1 低溫運輸，-20℃保存
1個 15mLDNA超濾離心管(9-15KD)
