使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產品名稱 | 未分化：PC-12 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0410 |
商品介紹：
名稱 未分化：PC-12 種屬大鼠 年齡（性別）雄性 組織來源腎上腺嗜鉻細胞瘤 生長特性半貼半懸 細胞形態(tài)不規(guī)則形 背景描述PC-12(未分化)細胞是來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤。PC-12(未分化)細胞表達神經(jīng)生長因子(NGF)受體，NGF可誘導產生神經(jīng)表型。PC-12(未分化)細胞不合成腎上腺素。 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋15%HS＋5% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項1、PC-12(未分化）細胞正常生長狀態(tài)為懸浮聚團，若需要用NGF誘導時，需要使用多聚-L-賴氨酸溶液（貨號 PB180523）包被培養(yǎng)瓶后促使細胞貼壁。 2、未分化、低分化和高分化的區(qū)別：未分化的PC-12從形態(tài)上看是圓形的，聚團生長的漂浮細胞；低分化的成多角形，有較短的突起；高分化的細胞有多個突起，突起數(shù)目不等，突觸較長，類似神經(jīng)元軸突。 3、低分化和高分化是在未分化的PC-12基礎上誘導產生的，低分化和高分化指的與神經(jīng)細胞表型的相似程度，高分化更接近神經(jīng)細胞表型。 |
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IFNA14 / Interferon alpha-14 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 RAB27B 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 GPHA2 / Glycoprotein hormone alpha 2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 KCT2 / C5orf
未分化：PC-12 2000mL TBE,5X TBE,5X 常溫保存
MTNR1B 褪黑素受體1B抗體 規(guī)格: 0.1ml
KLHL14 Kelch樣蛋白14抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/AP 堿性磷酸（AP）標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlZnT-1 鋅轉運蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
NF-M/Neurofilament M 中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/APC APC標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1ml
EDA2R/TNFRSF27 瘤壞死因子受體超家族成員27抗體 規(guī)格: 0.2ml
CENPF 有絲分裂著絲粒蛋白F抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Gold 膠體金標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.5ml
BIN3 細胞骨架銜接蛋白BIN3抗體 規(guī)格: 0.2mlFbxW2 FbxW2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
DKK1 抑蛋白DKK1抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-MAP4K4(Ser801) 磷酸化絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體 規(guī)格: 0.1ml
1mg 細胞松弛素 B Cytochalasin B -20℃保存
