參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:糞便基因組DNA提取試劑盒
產(chǎn)品貨號:YS-P01324
產(chǎn)品規(guī)格:32次/盒、50次/盒
產(chǎn)品分類:PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
人神經(jīng)鈣黏蛋白(NCAD) 苯甲酸雌二APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體
人I型前膠原羧基端原肽(PICP)苯甲酸雌二(標(biāo)準(zhǔn)品)甲胎蛋白單克隆抗體(包被)
人血小板衍生生長因子受體樣蛋白(PDGFRL)雌胎蛋白單克隆抗體(檢測)
人基膜聚糖(LUM)雌三(標(biāo)準(zhǔn)品)ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體
人淚腺富脯氨酸蛋白4(PRR4)泊甙(進(jìn)分)芳香烴受體抗體
人鞘脂激活蛋白原(PSAP)泊甙吸引素抗體
人前列腺素E合成酶(PTGES)泊甙(標(biāo)準(zhǔn)品)腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗體
人干擾素激基因15(ISG15)依西美坦(企標(biāo))蛋白激酶B2
人氨酰tRNA合成酶復(fù)合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)醋酸艾塞那肽血管生成素2抗體
人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2) 非那雄芳香化酶/色素P450/雌激素合成酶抗體
人12羥基二十烷四烯酸(12-HETE) 非那雄(標(biāo)準(zhǔn)品)腺苷A2A受體抗體
人15脂加氧酶(15-LO) 氟羅沙星蛋白激酶A錨定蛋白95抗體
人16α羥基雌酮1(16-α OHE-1) 氟羅沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運體蛋白抗體
人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶去整合素樣金屬蛋白酶8抗體
人白介素32(IL-32)氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)芳香乙酰脫乙?;笜拥鞍?抗體
人腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)氟比洛芬(國產(chǎn))ACN9蛋白抗體
糞便基因組DNA提取試劑盒Adiponectin 脂聯(lián)素抗體環(huán)戊烷 99%(GC)
ADM/AM 腎上腺髓質(zhì)素抗體4-氯-3-酚 99%
ADM (ProAM-N20) 腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)膽固 99%
ADM R 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體3-氯酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品
ADNP/NAP 活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體皮質(zhì)甾酮 98%
ADORA3 腺苷受體A3抗體硫化亞銅 99%
ADO 2-氨基乙硫雙加氧酶抗體天青石藍(lán) 97%
Integrin Alpha V 整合素αV抗體α-氯糖 98%,anomer ca 15%
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。